近年来,抗生素的滥用导致了耐药性、抗生素残留等问题,污染了畜禽产品以及周边环境,还会引起动物体内菌群失调,造成内感染或二重感染,甚至危害人类健康。欧盟、美国、日本等发达国家已经限制或禁止在饲料中添加抗生素（赵梦娇,2017）。益生菌微生态制剂是一种新兴的新型饲料添加剂,由于其绿色环保、无公害无残留的特点,逐渐成为代替抗生素的一种选择。给畜禽饲喂益生菌能够有效的避免残留抗生素药物和产生耐药性等一系列危害,还能够调节胃肠道内菌群平衡,促进畜禽的生长发育。酵母益生菌作为益生菌的一种,对于维持肠道稳态、防治肠道各种疾病、调节宿主免疫功能、防止有害病原体入侵、促进机体生长发育以及延缓衰老均有重要作用。以从肉鸡体内分离具有抑菌性酵母,从而获取优良益生性酵母菌株、应用于微生态制剂的研发、寻找抗生素的有效替代物为目的。本试验分离罗斯308肉鸡不同日龄不同肠段的酵母菌,筛选具有抑菌性的酵母,探究分离株Diutina catenulata的益生性,并用代谢组学初步分析Diutina catenulata的抑菌组分。首先对罗斯308肉鸡体内的酵母菌进行初步的分离鉴定。在无菌环境下,以罗斯308肉鸡为具体研究对象,分别从不同日龄肉鸡的不同肠段中刮取内容物,稀释涂板后镜检观察。随后用真菌通用引物ITS1-ITS4进行聚合酶链式反应（PCR）,初步筛选出28株酵母菌,主要分布在20日龄回肠和盲肠及30日龄的十二指肠。随后对初步分离得到的28株酵母进行抑菌性筛选。分别挑28株酵母纯化菌落,摇菌,纯化后分别点于平铺10^-3稀释度的E.coli、S.typhimurium、S.enteritidis、P.mirabilis、C.albicans。通过肉鸡酵母抑菌性筛选得到了一株对E.coli、S.typhimurium、S.enteritidis有较强抑菌性的Diutina属酵母菌catenulata。对分离得到的抑菌性酵母Diutina catenulata进行形态学、分子学、生长特性、抑菌性、培养条件、体内滞留情况等益生性方面的探究。试验表明筛选株Diutina catenulata在YPD固体培养基上为油脂状、奶油色菌落,呈现圆形突起,表面光滑、湿润、粘稠,一般直径为3μm左右。在5%血清诱导下产生长约6-10μm假菌丝。Diutina catenulata的能够在41℃下生长繁殖,最适生长温度为30℃,同时对人工胃酸和胆盐都有较强的耐受力。该菌株的菌体和培养上清够抑制E.coli、S.typhimurium和S.enteritidis,且发酵液在57 h左右表现出较强的抑菌作用。随着时间的增加其产酸能力先增强,56 h、57 h达到最强,随后逐渐减弱。Diutina catenulata能够在海兰褐雏鸡体内滞留约34 h,随后逐渐排出体外。用UPLC和QTOF方法对筛选株Diutina catenulata分泌的上清进行代谢组学。根据代谢组学分析所得的差异离子及上调情况分析候选抑菌组分为差异倍数最大的龙胆胺、5-羟基吲哚乙酸、吲哚乳酸、3,4-二甲氧基-1H-喹啉-2-酮4种物质。最后,将Diutina catenulata应用于动物试验。选取3日龄海兰褐雏鸡进行急性毒性试验和增重试验。在Diutina catenulata菌株的急性动物试验中,海兰褐雏鸡均没有死亡且血常规、脏器指数、体重变化等指标均正常。解剖后肠道内脏没有明显出现病变。同时在雏鸡心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、脑内部未分离出Diutina catenulata菌株。通过盲肠切片发现,四个急性毒性试验组的盲肠绒毛和粘膜层比对照组的在结构上有了一定的优化。同时在海兰褐雏鸡增重试验中,连续灌胃分离菌株的试验组和灌胃发酵上清的试验组相对于对照组在增重方面以及平均增重方面表现为显著增加的趋势（P<0.05）,并且料肉比显著低于对照组（P<0.05）。除此之外,胸腺指数也表现为显著或极显著提高（P<0.05）、回肠和直肠的平均肠道长度也有了显著增加（P<0.05）。