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新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种烈性、高度传染性疾病,给养禽业带来了巨大的经济损失。目前,常规疫苗毒株大多是NDV基因Ⅰ型或基因Ⅱ型,而当前我国优势流行毒株为NDV基因Ⅶ型,虽然它们属于同一血清型,但遗传距离相差较远。因此,免疫鸡群中非典型ND和带毒现象普遍存在,免疫失败时有发生,迫切需要研制与流行毒株基因型相匹配的ND疫苗。火鸡疱疹病毒(herpesvirus of turkey,HVT)疫苗是预防鸡马立克氏病的常用疫苗,具有较多的病毒复制非必需区可供外源基因的插入,被广泛应用于重组病毒活疫苗的构建。本研究拟以HVTFC126疫苗株为载体,构建表达基因Ⅶ型NDVHN糖蛋白的重组火鸡疱疹病毒,研制新型ND活疫苗。本研究通过PCR扩增出基因Ⅶ型NDVDT-2014株的HN基因,与人巨细胞病毒早期启动子(CMV)和TK poly A组成表达盒。将该表达盒插入到HVT FCl26疫苗株的US2非必需区片段中,构建转移载体pHVT-US2-HN。将pHVT-US2-HN转移载体与表达EGFP标志基因的重组HVT FC126病毒(rHVT-EGFP)基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经同源重组,将EGFP基因替换为HN基因表达盒,获得表达HN蛋白的重组病毒rHVT-US2-HN。通过 PCR、Southern-blot、Western-blot 和间接免疫荧光试验(IFA)对获得的重组病毒rHVT-US2-HN进行鉴定,并对其在CEF上的生长特性进行检测。结果显示:重组病毒rHVT-US2-HN中,HN基因表达盒已正确插入US2复制非必需区内,并能成功表达大小在70kD左右的目的蛋白。同时,重组病毒rHVT-US2-HN在CEF上表现出了与HVTFC126疫苗毒株相同的复制水平。本研究对重组病毒rHVT-US2-HN进行了免疫效力的初步评价。将80只1日龄SPF鸡随机分成4组,依次为rHVT-US2-HN免疫组、弱毒疫苗免疫组、攻毒对照组及空白对照组。其中,rHVT-US2-HN免疫组于1日龄颈部皮下接种5000噬斑形成单位(PFU)的rHVT-US2-HN;弱毒疫苗组于7日龄经滴鼻/点眼途径免疫1羽份LaSota疫苗。分别于7、14、21、28日龄采血分离血清,通过血凝抑制试验(HI)检测NDV抗体效价。除空白对照组外,其余3组于21日龄经滴鼻点眼途径以每只鸡105EID50的基因Ⅶ型NDV DT-2014株攻毒。攻毒后第3d、5d,采集喉头、泄殖腔拭子,进行病毒分离,检测各组试验鸡的排毒情况;并连续观察7天,统计各试验组的临床症状、发病率和死亡率。结果显示:rHVT-US2-HN免疫组试验鸡在接种后抗体水平呈上升趋势。攻毒后7天,对照组的死亡率为100%,rHVT-US2-HN免疫组的死亡率为50%,弱毒疫苗免疫组的死亡率为10%。表明重组病毒rHVT-US2-HN对基因VII型NDV强毒株的攻击有一定的免疫保护效果,为ND的预防和控制提供了新的候选疫苗株。