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目的:鼻咽癌在广西高发,初发隐匿性高、病情发展迅速易转移。原癌基因的激活和抑癌基因的失活与鼻咽癌病变相关,而抑癌基因的失活在鼻咽癌的发生发展中更为普遍。研究发现促微管聚合蛋白3 (Tubulin polymerization promoting protein 3,TPPP3)在不同肿瘤中所表现的功能有所不同,但在鼻咽癌中尚未见报道。本课题将研究TPPP3在鼻咽癌中的表达情况,进一步探讨TPPP3对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。方法:1、通过生物信息学分析TPPP3基因在鼻咽癌和正常鼻咽组织中的表达。2、应用qRT-PCR技术检测16例鼻咽癌和16例鼻咽粘膜慢性炎组织中TPPP3 mRNA的相对表达水平;应用免疫组织化学技术检测72例鼻咽癌和51例鼻咽粘膜慢性炎组织中TPPP3蛋白的表达水平。3、应用qRT-PCR技术检测正常鼻咽上皮NP69细胞和鼻咽癌CNE2、HK1、5-8F、HONE1细胞中TPPP3 mRNA的相对表达水平。4、分别构建含TPPP3基因过表达片段和空载片段的慢病毒,感染鼻咽癌细胞株5-8F、HONE1,经嘌呤霉素筛选得到稳定细胞株,分别作为TPPP3过表达实验组(5-8F-TPPP3、HONE1-TPPP3)和空载组(5-8F-NC、HONE1-NC),未处理的细胞作为空白对照组(5-8F、HONE1)。5、应用qRT-PCR和western blot技术检测各组细胞中TPPP3 mRNA和蛋白的表达水平,以验证TPPP3的过表达效果。6、应用CCK8实验和平板细胞克隆形成实验研究TPPP3过表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响。7、应用细胞划痕实验、Transwell迁移实验研究TPPP3过表达对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。8、应用Transwell侵袭实验研究TPPP3过表达对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响。9、应用qRT-PCR技术检测各组细胞中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达水平。结果:1、在31例鼻咽癌和10例正常鼻咽组织的全基因组芯片数据中,鼻咽癌组织中TPPP3 mRNA的相对表达水平明显低于正常鼻咽组织(P<0.05)。2、16例鼻咽癌和16例鼻咽粘膜慢性炎组织中TPPP3 mRNA的相对表达水平分别为0.114±0.069和1.340±0.707。相对于鼻咽粘膜慢性炎组织,TPPP3 mRNA在鼻咽癌组织中的相对表达水平明显降低(P<0.05)。在鼻咽癌组织中TPPP3蛋白的阳性表达率为9.72% (7/72),在鼻咽粘膜慢性炎组织中TPPP3蛋白的阳性表达率为92.16% (47/51),TPPP3蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率明显低于鼻咽粘膜慢性炎组织(P<0.05)。3、TPPP3 mRNA在NP69、CNE2、HK1、5-8F和HONE1细胞中的相对表达量分别为 1.004±0.013、0.026±0.005、0.020±0.004、0.148±0.005、0.073±0.005。鼻咽癌CNE2、HK1、5-8F和HONE1细胞中TPPP3 mRNA的相对表达量均明显低于正常鼻咽上皮 NP69 细胞(P<0.05)。4、5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3细胞中TPPP3 mRNA的相对表达量分别为1.003±0.013,1.114±0.132,141.263±0.523。HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3 细胞中 TPPP3 mRNA的相对表达量分别为1.004±0.058,0.928±0.104,125.037±0.631。与空载组、对照组相比,实验组TPPP3 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),表明5-8F-TPPP3、HONE1-TPPP3稳定细胞株成功构建。5、CCK8实验结果显示,TPPP3过表达实验组与空载组、对照组在Oh的OD值相比无明显差异,结果无统计学意义(P>0.05);与对应的空载组和对照组相比,TPPP3过表达实验组细胞在四个时间点(24h、48h、72h、96h)的OD值明显降低(P<0.05)。5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3 的克隆形成率分别为(50.6± 1.7)%、(52.1±1.1) %、(32.5±1.1) %,HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3 的克隆形成率分别为(58.0±2.7)%、(56.4±2.2) %、(34.4±2.2)%,TPPP3 过表达实验组细胞克隆形成率明显低于对应的空载组和对照组(P<0.05)。6、划痕实验结果显示,5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3细胞在36h向划痕区域中央迁移的相对迁移率分别为(53.91 ±1.05)%、( 52.72±0.81)%、(51.61 ± 0.95)%;HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3细胞向划痕区域中央迁移的相对迁移率分别为(51.04±0.90) %、(49.66±0.85) %、(48.91±0.50) %。各组细胞之间相对迁移率无明显差异,结果无统计学意义(P>0.05)。Transwell迁移实验结果显示,5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3在24h穿膜细胞数量分别为265.0±6.2、266.0±4.4、269.7±6.1 个;HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3穿膜细胞数量分别为236.3±3.5、245.0±4.0、246.3±4.1个。各组穿膜细胞数量之间无明显差异,结果无统计学意义(P>0.05)。7、Transwell侵袭实验结果显示,5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3在24h穿膜细胞数量分别为312.3±7.6、308.0±6.6、202.3±7.1 个;HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3 穿膜细胞数量分别为293.3±3.1、298.3±7.1、209.0±7.0个。与对应的空载组、对照组相比,TPPP3过表达实验组穿膜细胞数量明显减少(P<0.05)。8、5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3 细胞中 MMP-2mRNA 的相对表达量分别为 1.004±0.002,0.922±0.063,0.065±0.020;5-8F、5-8F-NC、5-8F-TPPP3 细胞中 MMP-9mRNA的相对表达量分别为 1.008±0.010,0.963±0.101,0.469±0.041。HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3细胞中MMP-2 mRNA的相对表达量分别为1.003±0.04,0.987±0.063,0.696±0.044;HONE1、HONE1-NC、HONE1-TPPP3细胞中MMP-9 mRNA的相对表达量分别为1.013±0.014,0.969±0.023,0.715±0.073。TPPP3过表达实验组较对应的空载组、对照组MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.05)。结论:1、TPPP3 mRNA和蛋白水平在鼻咽癌组织中的表达下调,及TPPP3 mRNA在鼻咽癌细胞中的表达下调。2、TPPP3过表达可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖及侵袭能力,而对鼻咽癌细胞的迁移能力无明显影响。3、TPPP3过表达可能降低MMP-2、MMP-9的表达,提示TPPP3表达下调可能是一种与鼻咽癌侵袭有关的分子标志物。