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目的：恶性肿瘤是目前严重威胁人类生命健康的常见病、多发病，已成为造成人类死亡的第二位疾病原因。恶性肿瘤的治疗以综合性治疗措施为主，包括手术、化疗、放疗、生物治疗、免疫治疗等。其中，化疗在根治恶性肿瘤，防止复发和转移方面起着不可替代的作用。但临床化疗中存在两大障碍影响化疗的疗效：一方面肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药性而直接导致化疗失败；另一方面化疗药物造成严重的骨髓抑制使化疗方案不能顺利实施而间接导致化疗失败。大量研究证实，影响化疗疗效的两大障碍均与多药耐药（multidrug resistance gene 1 mdr1）基因有着密切的关系。肿瘤细胞由于过度表达mdr1基因而产生多药耐药性，使其对化疗药物不敏感而不能被有效杀灭；骨髓细胞极低水平的表达mdr1基因而对化疗药物异常敏感，使其极易被化疗药物损伤。本研究通过分子生物学技术，用含人mdr1全长cDNA逆转录病毒载体转染新西兰大白兔骨髓单个核细胞，建立一套完整、稳定、高效的体外基因转染体系将外源性mdr1基因导入兔骨髓单个核细胞，评价转染后mdr1基因在靶细胞中功能性的表达情况，为进一步<WP=10>将转染的骨髓细胞自体移植保护受体骨髓免受大剂量化疗药物的损伤实验提供基础。 方法：采用秋水仙碱（90ng/ml）筛选携带人mdr1全长cDNA的逆转录病毒包装细胞PA317-HaMDR1/A；收集并浓缩病毒上清，采用浓缩病毒上清转染法将mdr1基因导入兔骨髓单个核细胞；采用PCR方法、免疫组化染色法、柔红霉素排出试验分别从基因、蛋白质和功能水平检测mdr1基因在兔骨髓单个核细胞中的功能性表达情况，探讨转染时间和转染效率、功能之间的关系。结果：（1）经秋水仙碱筛选后，逆转录病毒包装细胞PA317-HaMDR1/A培养上清液中的病毒滴度提高了6.77倍；（2）建立了一套完整、稳定、高效的mdr1基因体外转染体系和方法；（3）PCR法证实外源性mdr1基因可有效地在整合到兔骨髓单个核细胞基因组中；（4）免疫组化法测得体外转染2日、4日、6日后，转染细胞P-糖蛋白（P-glycoprotein P－gp）表达的阳性率分别为22%、35%、37%；（5）柔红霉素排出试验证实导入的mdr1基因表达产物P-gp有药物外排泵功能。结论：通过逆转录病毒载体可在体外将外源性mdr1基因有效的转入兔骨髓单个核细胞中，转染的mdr1基因能整合到靶细胞基因组中并功能性表达；为进一步自体移植转染细胞保护骨髓免受大剂量化疗损伤的体内实验提供基础。