【摘 要】
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澳大利亚扇子花是草海桐科草海桐属的优良花木。本实验室引进一批扇子花品种。部分品种在外部形态上差异很小,不易区分。本研究采用ISSR分子标记技术,在DNA水平上对其进行鉴别研究。同时,对耐寒性较差但观赏性很好的扇子花品种“梦幻白”,开展了农杆菌介导的转ADC基因研究,以期提高其的抗逆性。
主要研究结果如下:(1)品种鉴别:从八个扇子花品种的叶片提取基因组DNA,运用ISSR技术检测了这些品种的遗传差异。仅用3个ISSR引物就扩增出29条带谱,其中28条为多态性带,多态性百分率为96.55％。选取其
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澳大利亚扇子花是草海桐科草海桐属的优良花木。本实验室引进一批扇子花品种。部分品种在外部形态上差异很小,不易区分。本研究采用ISSR分子标记技术,在DNA水平上对其进行鉴别研究。同时,对耐寒性较差但观赏性很好的扇子花品种“梦幻白”,开展了农杆菌介导的转ADC基因研究,以期提高其的抗逆性。
主要研究结果如下:(1)品种鉴别:从八个扇子花品种的叶片提取基因组DNA,运用ISSR技术检测了这些品种的遗传差异。仅用3个ISSR引物就扩增出29条带谱,其中28条为多态性带,多态性百分率为96.55％。选取其中7条特征带即可将八个品种完全区分开。
(2)转基因技术体系:a)取无菌苗的幼嫩叶片,在愈伤诱导培养基中预培养一周,之后接种到含不同浓度卡那霉素的愈伤诱导培养基上,20d后观察分析在含50mg/L卡那霉素的培养基中培养的叶片全部死亡。b)取200μl菌液加入到50ml含有不同浓度噻孢霉素的LB液体培养基中,于28℃、180rpm震荡培养过夜,结果表明在含200mg/L噻孢的培养基中,农杆菌被完全抑制。c)切取无菌苗叶片接种到愈伤诱导培养基上,25℃,光周期16h,光照强度1000-20001ux条件下,预培养不同天数,结果表明最佳预培养天数为2-3d。d)采取对数生长期的农杆菌的菌液(OD600≈0.5),进行不同时间侵染实验,观察愈伤长势,结果表明最佳侵染时间为3min。e)将最佳条件侵染的叶片共培养不同天数,结果表明在3d内能够有效转化。
(3)转基因植株鉴定:在最佳转化体系下,将抗性愈伤组织转入到继代培养基中,待长出植株时,进行目的基因ADC的微量PCR检测。在转基因植株中检测到1400bp的基因片段,而非转基因植株无此片段。因此,初步鉴定ADC基因已转入“梦幻白”植株中。
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