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氯霉素(chloramphenicol,CAP)是一种广谱抗生素,于1949年引入临床实践,由于其价廉易得,治疗效果好,广泛应用于动物各种传染病的治疗。随着研究的深入,发现CAP具有抑制血细胞形成、导致再生性障碍贫血等毒性,它在食用性动物体内的残留对人类健康构成了巨大的威胁。本研究在制备CAP全抗原的基础上,研制抗CAP单克隆抗体；利用抗CAP单克隆抗体建立IPCR分析法,检测牛奶中CAP的残留。主要研究内容如下：1、CAP全抗原的合成及多克隆抗体的制备以BSA.OVA为载体蛋白,分别采用EDC法和重氮化法制备CAP全抗原,结果以EDC法成功制备CAP全抗原。其免疫的3号小鼠血清效价大于1：64000,对CAP的抑制效果最好,表明成功制备抗CAP多克隆抗体。2、抗CAP单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的初步建立采用细胞融合和杂交瘤分选技术,经过筛选和亚克隆,成功获得一株能稳定分泌抗CAP单克隆抗体的细胞株,命名为1B7,抗体亚型为IgG1,κ。将1B7接种于Balb/c小鼠腹腔,得到的小鼠腹水经纯化后效价为1：512000。以该抗体建立ELISA竞争抑制标准曲线,其线性回归方程为y=-10.121n(x)+70.458(R2=0.9882),IC50和LOD分别为7.39、0.24ng/mL,检测范围(IC20-IC80)为0.39～145.47ng/mL,与TC、NFX、KAN、AMP、SD未见明显交叉,与CAPs的交叉率高达2052.8%。3、基于抗CAP单克隆抗体的免疫PCR检测方法的初步建立初步建立IPCR方法检测CAP,得到的最佳实验条件如下：抗原包被浓度为10μg/mL,生物素酰化抗体的工作浓度为1：64000,亲和素工作浓度为10μg/mL,生物素标记的DNA投入量为10pg。在最佳条件下建立IPCR标准曲线,其线性回归方程为y=0.10791n(x)+13.19,R2为0.9877,最低检测限为1.380pg/mL。经重复性实验,得到其批内、批间变异系数均小于10%。4、基于抗CAP单克隆抗体的IPCR分析法的初步应用采用IPCR分析法和市售ELISA试剂盒分别检测了市场上随机购买的20份牛奶样品,结果表明两种方法无显著性差异。其中IPCR分析法的回收率为86.8～106.0%,相对标准偏差为4.94-7.51%。