抗真菌的细菌菌株的筛选、分离与鉴定

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真菌往往会和人类有一定直接或间接的联系,大多数真菌对人类是有益的。但有些真菌对人类有一定的危害,可引起食物霉变,或者引发人类疾病等。目前主要有两种方法控制真菌对人类的危害:一是使用山梨醇、醋酸钠、延胡索酸等化学物质抑制真菌;二是利用物理的方法抑制真菌。但两者都存在一定的弊端,如污染严重,同时可能会残留对人类有害的物质等。因此,寻找抑制真菌的生物法显得尤为重要。本研究选取了几种核果类被感染的果蔬作为实验材料,通过稀释涂布平板法,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌作为实验对照,最终从梨和油桃中筛选、分离出三株能够抑制真菌黑曲霉真菌的细菌菌株。分别命名为为001、003、004,其中001来自于梨,003、004来自于油桃。对各菌株的16SrRNA序列测序及分析,经、NCBI BLAST比对结果显:示三株菌中的001号菌株的16SrRNA序列与已报道的成团泛菌的16SrRNA序列的同源性达99%,由此推测001号菌株属于成团泛菌属;003号菌株的16SrRNA序列与已报道的铜绿假单胞菌的16SrRNA序列的同源性达99%,由此推测003号菌株属于假单胞菌属;004号菌株的16SrRNA序列与已报道的肠杆菌的16SrRNA序列的同源性达99%,由此推测004号菌株属于肠杆菌属。为了更进一步确定三株菌株的种属关系,又分别对它们进行了形态学及生理生化性质的鉴定,结果分别如下:001号菌株,革兰氏阴性菌,菌体大小长(0.5~1.0)μm×宽(1~3)μm,大多数菌株产生黄色素,不透明,氧化酶、接触酶反应阳性,甲基红反应阴性,V-P反应、硝酸盐反应、吲哚反应阳性,精氨酸双水解反应、明胶液化反应、硫化氢反应阴性,脲酶反应阳性,柠檬酸盐利用反应阳性,葡萄糖氧化发酵为发酵型。结合该菌的16SrRNA序列分析以及形态学及生理生化试验推断001号菌株属于成团泛菌属。003号菌株,菌体大小长(1.5~5.0)μm×宽(0.5~1)μm,不透明,粘稠,革兰氏阴性菌,氧化酶、接触酶反应阳性,甲基红反应阴性,V-P反应阴性,硝酸盐反应阳性,吲哚反应、精氨酸双水解反应阴性,明胶液化反应阳性,硫化氢反应阴性,脲酶反应、柠檬酸盐利用反应阳性。结合该菌的16SrRNA序列分析以及形态学及生理生化试验推断003号菌株属于假单胞菌属。004号菌株,菌体大小长(1.2~3.0)μm×宽(0.6~1.0)μm,不透明,革兰氏阴性菌,氧化酶、接触酶反应阳性,甲基红反应阴性,V-P反应、硝酸盐反应阳性,吲哚反应、精氨酸双水解反应阴性,明胶液化反应阳性,硫化氢反应阴性,脲酶反应为阳性,柠檬酸盐利用反应阴性,结合该菌的16SrRNA序列分析以及形态学及生理生化试验推断004号菌株属于肠杆菌属。对以上的三株菌株做了抑菌活性物质的鉴定试验,对001号菌株做了甲醇和丙酮的抽提试验,发现抽提后的001号菌株没有抑菌活性,抑菌活性物质可能不是脂肽类物质。对001、003号菌株做了硫酸铵沉淀蛋白质试验,发现沉淀后的001、003号菌株依然具有抑菌活性,能够抑制黑曲霉生长,抑菌活性物质可能是蛋白质类物质。
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