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目的:研究胃癌腹腔脱落癌细胞形成的相关病理因素，检测肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度(MVD)在浆膜浸润(T3)胃癌中的表达，探讨胃癌细胞腹腔脱落的病理分子基础及与预后的关系。同时观察靶向抑制血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子(EGF)对胃癌细胞生物学的影响。
方法:采用大剂量生理盐水(1000 ml)腹腔灌洗方法，收集132例胃癌(浸润深度≤T3)手术患者腹腔冲洗液，同时进行细胞学检测(peritoneal lavage cytology，PLC)和细胞角蛋白18(CK18)免疫化学检测寻找癌细胞；分析脱落细胞阳性率与临床特征的关系；并从病例中选择80例浆膜浸润(T3)胃癌手术患者，运用免疫组化方法，对其癌组织中HGF、EGF、VEGF和CD34(用以标示MVD值)进行检测；所有病人进行严密的术后随访。运用RT-PCR法，半定量检测80例浆膜浸润(T3)胃癌手术患者新鲜胃癌组织中EGF和VEGF mRNA的表达，并以腹腔冲洗液检测结果分组进行比较。用MTT法、细胞移行实验、基质黏附实验和重组基底膜侵袭实验比较四种不同分化程度人胃癌细胞BGC823、MGC803、HGC27、SGC7901增殖、运动、黏附及侵袭能力的差异；检测四种细胞中EGF、EGFR、VEGF、VEGFRmRNA的表达，筛选出分子表达最强细胞株，加入重组人血管抑制素(恩度)或西妥昔单抗(爱必妥)，检测加药后细胞中EGF、EGFR、VEGF、VEGFRmRNA的表达变化，同时观察细胞增殖、运动、黏附及侵袭能力的改变。
结果:胃癌患者腹腔冲洗液PLC阳性率为42.42%(56/132)，细胞角蛋白CK18免疫化学检测阳性率为50%(66/132)。PLC阳性病例CK18检测均为阳性，PLC阴性患者有10例CK18检测为阳性，其中6例经病理科医师会诊最后被确定为脱落癌细胞阳性。因此，本组病例脱落细胞阳性率为46.97%(62/132)。脱落细胞阳性率与其病变大小、Borrmann分型和分化类型明显相关(P<0.05)，与生长方式、淋巴结转移、浆膜类型及受侵面积显著相关(P<0.01)，而与病人的性别、肿瘤部位、Lauren分型无关。80例浆膜浸润(T3)胃癌癌组织中HGF、EGF和VEGF阳性率分别为57.50%、52.50%和55.00%，与MVD值的相关性具有统计学意义(P<0.05)。HGF、EGF、VEGF和MVD值与脱落细胞阳性率、肿瘤生长方式等临床特征相关(P<0.05)。单因素分析显示手术患者术后半年内复发率与HGF、EGF、VEGF、MVD值、腹腔冲洗细胞学阳性、浆膜受侵等临床特征密切相关(P<0.01)。脱落细胞阳性组的EGF和VEGFmRNA在癌组织中的表达明显高于脱落细胞阴性组(P<0.05)；胃癌细胞MGC803、HGC27、BGC823、SGC7901增殖、移行、侵袭、黏附能力依次降低(P<0.05)； EGF、EGFR、VEGF、VEGFR的mRNA在MGC803细胞中表达最高，并且加药后细胞中几种分子的表达明显降低(P<0.05)，其在加药后增殖、移行、侵袭、黏附能力明显降低，与加药前相比差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:大剂量生理盐水腹腔灌洗PLC结合CK18免疫化学检测脱落癌细胞具有更高的敏感性及特异性；胃癌脱落细胞阳性率、HGF、EGF、VEGF和MVD值表达与肿瘤临床病理因素有一定的相关性；检测几种因子对预测胃癌细胞腹腔脱落和术后复发具有一定的参考价值。VEGF和EGF的表达与胃癌细胞腹腔内的脱落密切相关，同时与胃癌细胞体外移行、黏附和侵袭等特性密切相关；特异性抑制VEGF和EGF可以降低胃癌细胞体外增殖、移行、侵袭、黏附能力:以VEGF和EGF为靶点可作为抑制胃癌腹膜转移的潜在治疗策略。