利用APE-PCR方法筛选白血病原病毒插入位点及相关基因的研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cyh_sh
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病,它的发病机制至今尚未明确,影响其发病的因素有很多,病毒是影响因素之一。目前一般认为,前病毒插入性诱变激活原癌基因可以产生白血病。于是寻找原病毒的插入位点,检测白血病相关的遗传学变异并发现相关的基因就具有重要的意义。另外,插入诱变对于在肿瘤生成中探索重要的生物学遗传调节和传导途径是一种有用的策略,而这一策略的成功实施主要依赖于一种有效的方法来鉴定基因组中的插入位点。目的:本文旨在研究出一种新的高效简便地用于筛选白血病的原病毒插入位点和其他类型DNA元件插入位点的PCR方法;寻找在急性髓细胞白血病(AML)发生和产生耐药过程中原病毒的共同插入位点,发现相关基因。方法:通过对原有PCR方法在酶切组合、连接效率、纯化方法等方面进行改进得到一种用于克隆基因组DNA插入位点的PCR方法—末端腺苷引物延伸聚合酶链式反应(APE-PCR);同时构建一种运用阿糖胞苷(Ara-C)治疗的AML小鼠模型,利用APE-PCR方法对该模型中收集到的原发性肿瘤样本进行原病毒插入位点鉴定;最后利用高通量测序法分析和寻找共同插入序列和相关基因。结果:我们已经证实APE-PCR方法可以扩增出更多更长的原病毒插入位点相关片段,产生较低的非特异性背景,需要更少的步骤和更少的DNA样本量,还可以灵活地选择限制性内切酶,且花费更低的成本。在这个方法中利用纳米级的磁珠替代常规磁珠可以提高其效率,而且使用少量的DNA也可以回收和分析原病毒插入位点(PIS)。另外,已经初步筛选得到部分与白血病发生可能相关的基因,但还需要进行进一步的验证。结论:APE-PCR在描绘原病毒插入位点上是一种有效的方法,而且可能也适用于筛选其他类型DNA元件的插入位点。本实验中已经初步筛选得到一些与白血病发生可能相关的基因,为白血病的发生及相关的功能基因组学研究提供了一种可靠的依据。
其他文献
介绍了六米三拦焦机导焦栅装置导焦对门时存在的问题,及解决方案。
由于受所处位置及环流系统的影响,干旱成为内蒙古自治区阿拉善的主要气象灾害之一,对当地经济发展尤其农牧业生产重大影响。随着气候变暖,阿拉善地区趋于暖干化,只有加强干旱
药物中间体7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的工业化生产国内多局限于化学裂解法,由于该法有某些缺点,因此,本文介绍了环保型的酶法催化生产7-ACA的制备方法.该制备方法以头孢菌素C为
2010年以来,莫桑比克陆续发现大型天然气气田,而该国对天然气需求较少,大部分天然气需要进行液化后出口到国际市场。莫桑比克目前有三个液化天然气项目正处于研究和工程建设
本文以文献法为主要科学研究方法,重点论述了素质教育理念下高校体育教学方法革新的方向举措,以及践行新课改的一些理念与方法。高校体育教学方法革新需要各级各类高校体育教
联盟型职教集团是行业内主要企业和相关企业以及同类院校共同组建的非法人机构。本文以联盟型职教集团建立的校企平台为例,分析职教集团在运行过程中出现的问题和应对策略。
为进一步提升村干部履职尽责能力,推动农村党建重点任务落实,近日,白山市江源区委举办农村干部培训班,针对村干部工作思路不广、招法不多等问题,着力在"精、活、严"上做文章,夯
目的建立HPLC法同时测定安坤胶囊中栀子苷、芍药苷、特女贞苷、蟛蜞菊内酯和丹皮酚含量。方法采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶
以超滤/纳滤组合工艺深度处理钱塘江水,探讨了运行参数对该工艺出水水质的影响以及物理和化学清洗的效果。结果表明,通量的增加以及运行周期和浓水排放周期的延长均可在一定
农业品牌是农业产业化发展的必由之路,只有努力打造一批特色农产品品牌及名牌,提高其市场知名度和竞争力,才能有力促进特色农业产业化规模健康发展,也才能提高农产品综合竞争力,促