论文部分内容阅读
第一部分
淫羊藿苷对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的防治作用
目的:观察淫羊藿苷对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的防治作用。
方法:以线栓大脑中动脉诱导小鼠局灶性脑缺血再灌注。缺血前30 min灌胃给于不同剂量的淫羊藿苷(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1、200 mg·kg-1)。观察药物对缺血再灌注后神经功能缺损症状、脑梗死面积、死亡率、HE染色的影响。
结果:(1)MCAO小鼠神经行为缺陷评分模型组有不同程度的神经行为缺陷,藿苷剂量(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1、200 mg·kg-1)灌胃给于呈剂量依赖性的改善缺血再灌注小鼠神经行为缺陷。(2)MCAO小鼠梗塞面积及24 h内的死亡率测定藿苷剂量(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1)灌胃给于呈剂量依赖性的减少缺血再灌注小鼠脑组织的梗塞面积和降低死亡率,淫羊藿苷200 mg·kg-1组死亡率增加。(3)MCAO小鼠病理学检查存活细胞减少,坏死严重,淫羊藿苷剂量(25 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1、200 mg·kg-1)灌胃给于呈剂量依赖性的改善梗塞区神经细胞的变性程度。
结论:淫羊藿苷给于灌胃对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。
第二部分反相高效液相色谱法测定小鼠脑组织磷酸二酯酶活性的以及淫羊藿苷体外处理的影响
目的:建立小鼠脑组织中(皮层、海马、纹状体)磷酸二酯酶(PDE)活性的反相高效液相色谱法测定法,并观察淫羊藿苷体外对磷酸二酯酶的抑制作用。
方法:小鼠脑组织(皮层、海马、纹状体)匀浆后,可溶部分为酶样品,以环鸟苷酸(cGMP)和环腺苷酸(cAMP)为反应底物,使用反相高效液相色谱法,测定小鼠脑组织(皮层、海马、纹状体)PDE活性。
结果:底物cGMP、cAMP分离良好,无干扰,cGMP在2~100μmol·L-1,cAMP在0.7~50μmol·L-1的范围内线性良好。方法的平均回收率在90.0%~110.0%内,日内及日间RSD均<10%。淫羊藿苷呈剂量依赖性的抑制能分解cGMP的磷酸二酯酶和能分解cAMP的磷酸二酯酶的活性,皮层中其半数抑制浓度(IC50)分别为275.0±39.4μmol·L-1和85.1±14.2μmol·L-1,海马中IC50分别为125.73±25.8、67.2±15.2μmol·L-1,纹状体中IC50分别为121.11±13.7、40.78±10.23μmol·L-1。
结论:根据底物量的减少,确认小鼠脑组织中(皮层、海马、纹状体)磷酸二酯酶的存在,淫羊藿苷在体外对磷酸二酯酶有抑制作用。
第三部分小鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中PDE、SOD和MDA的变化及淫羊藿苷的影响
目的:观察小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后24h内脑皮层中磷酸二酯酶(PDE)活性、超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化趋势及淫羊藿苷对PDE、SOD及MDA的影响。
方法:以线栓大脑中动脉诱导小鼠局灶性脑缺血再灌注,缺血前30 min灌胃给于淫羊藿苷(100 mg·kg-1),分别于缺血后0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h采样。应用高效液相(HPLC)测定各组小鼠脑皮层中磷酸二酯酶(PDE)的活性,观察脑缺血后24h内PDE在脑皮层中的变化;应用比色法测定各组小鼠脑皮层SOD活性和MDA含量。
结果:0.5 h、1 h、2 h时模型组cGMP-PDE有升高(P<0.01);淫羊藿苷组阻遏其升高(P<0.01)。0.5 h、1 h、2 h、24 h时模型组cAMP-PDE活性有升高(P<0.05);淫羊藿苷组阻遏其升高(P<0.01)。在各时间点模型组SOD活性都有降低(P<0.01):淫羊藿苷组阻止其降低(P<0.01)。1 h、2 h、4 h、8 h、24 h时模型组MDA含量有升高(P<0.01):1 h、4 h、8 h、26 h时淫羊藿苷组阻遏其升高(P<0.01)。
结论:局灶性脑缺血再灌注影响脑皮层中PDE、SOD的活性以及MDA的含量。灌胃给予淫羊藿苷对于维持PDE、SOD的活性以及降低MDA的含量有一定的作用,提示可能是其发挥防治作用的相关机制。