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目的:在生长发育阶段一系列的因素如不良的咬合习惯、关节盘移位、心理因素等都会造成髁突软骨的损伤。髁突软骨损伤后会对髁突和下颌骨的生长发育产生严重的负面影响,不仅对患者的生活造成极大障碍,同时也会使患者产生极大的心理负担。因此,及时有效地修复生长发育期髁突软骨损伤十分必要。目前针对生长发育期髁突软骨损伤主要的治疗方案仍存在着很多不足之处。本实验旨在观察自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对生长发育期兔髁突软骨损伤修复的组织学和分子学变化,以探讨富血小板血浆对生长发育期髁突软骨损伤的修复作用,为治疗生长发育期髁突软骨损伤提供理论依据。方法:1.髁突软骨损伤动物模型的建立采用新西兰大白兔构建髁突软骨损伤动物模型。全麻下用慢速手机和裂钻在下颌骨髁突关节前斜面中央处制备一直径为3 mm,深度为2 mm的圆形软骨缺损区。2.实验分组选取3个月龄新西兰大白兔36只,随机分为三组,每组各12只,分别为假手术组、损伤组以及PRP组。损伤组将生理盐水置于缺损区,PRP组以PRP凝胶充填缺损区,假手术组不造成髁突软骨损伤。分别于术后6周、12周处死并取材。3.自体富血小板血浆的制备与激活采集实验动物新鲜全血10 m L,采用“二次离心法”制备PRP。第1次离心以250×g离心10 min,第二次离心以1000×g离心10 min,制得PRP约1.5 m L。取1 m L PRP加入活化剂激活形成PRP凝胶。4.血小板计数分别取0.5 m L含有4%枸橼酸钠的全血和PRP放置于冰盒中保存并送中国医科大学附属口腔医院检验科,对不同样本中血小板含量进行计数分析。验证采用该方法制备的PRP中血小板数量是否满足本实验要求。5.观察结果及评价指标术后6周和12周时,采用注射过量麻药的方法处死各组实验动物并取材。采用国际软骨修复协会(International Cartilage Repair Society,ICRS)大体评分标准对其进行大体评分。苏木素-伊红(HE)及番红O固绿染色进行组织学检测,并采用ICRS组织学评分进行评价。Western blot、q-PCR进行分子学检测。结果:1、血小板计数兔全血和PRP中血小板的平均浓度分别为:214.54±4.68×109/L和1191.24±32.20×109/L,后者是前者的5.55±0.16倍,两者之间血小板含量有显著性差异(P﹤0.05)。符合通过“二次离心法”制备PRP的要求,满足了目前实验需求。2、大体观察及评分术后6周PRP组已可见缺损区域被类软骨样组织充填,髁突发育良好,大小、形态未见明显变化。术后12周大体观察可见PRP组软骨缺损区修复良好,新生的类软骨样组织与周围正常组织基本融合,未见明显软骨损伤的痕迹,髁突及下颌骨发育良好,未见明显下颌骨发育不足的表现。ICRS评分显示,术后4周和8周时,PRP组的软骨修复程度均显著优于损伤组(P﹤0.05)。3、HE染色术后6周,损伤组被少量无序排列的纤维组织覆盖,表面粗糙。PRP组可见缺损区域被新生组织充填完好,表面较为平整,高度与周围组织基本一致,两者连接处可见少量裂隙。术后12周,损伤组纤维组织显著增多。PRP组可见缺损区修复良好,与周围组织融合良好,未见明显痕迹。4、番红O固绿染色术后6周,损伤组缺损区未见番红O着色。PRP组缺损区域底部可见微弱的番红O着色,与周围正常组织相比较薄。术后12周,损伤组缺损区可见少量软骨外基质形成。PRP组,缺损区域底部可见明显的番红O着色,与周围组织相近,但透明软骨的含量仍少于正常组织。5、Western blot检测术后6周、12周PRP组的Col I、Col II、Sox9和Aggrecan蛋白的表达量均高于损伤组。6、q-PCR检测术后12周,PRP组中Col I、Col II、Sox9和Aggrecan m RNA的相对表达明显高于损伤组(P﹤0.05)。结论:生长期髁突软骨损伤后随着生长发育的进行损伤难以自行修复,激活后的自体富血小板血浆可以有效地修复生长期髁突软骨损伤,自体PRP治疗可作为修复生长期髁突软骨损伤理想的方案。