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真菌传植物病毒通过连续继代机械接种易发生自然缺失突变,所产生的病毒缺失型RNA或者缺失干扰型RNA(D/DI-RNA)常常能够影响辅助病毒的相关生物学性状。由禾谷多粘菌(Polymyxa graminis)传播的小麦黄色花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的自然缺失突变研究未见报道,为了深入开展WYMV基因功能的研究,本文通过继代机械接种侵染小麦,对WYMV产生的自然缺失区域进行了鉴定和相关的生物学功能研究。试验利用WYMV潢川分离物连续继代机械接种感病小麦品种鄂恩1号,利用RT-PCR扩增技术和Northern blot检测,在经WYMV继代机械接种12代以上的感病小麦中发现了缺失型的病毒RNA1(defective RNA1,D-RNA1),并在随后至26代的继代接种发病材料中稳定存在。序列分析结果表明,D-RNA1由病毒RNA1发生内部缺失而产生,从RNA1 5′端非编码区(第68nt)到CI基因编码区的3′端(第2448nt)共缺失2380个核苷酸,在缺失区域两端的结合位点存在六个碱基的正向重复序列。据此对D-RNA1的缺失机制进行了讨论,认为由一种模板转换机制导致了缺失的发生。 在连续机械接种导致产生D-RNA1的同时,含有D-RNA1的WYMV能够明显加重发病症状,接种发病时间缩短,接种发病率也有所提高,并逐渐趋于稳定。 在室内砂培体系中,经过P.graminis接种非寄主植物-大麦,滤除所携带的WYMV,筛选获得了无毒P.graminis。利用无毒P.graminis与病毒叶面机械接种配合,使无毒P.graminis重新获得WYMV感染。随之进行的P.graminis传播WYMV感染小麦试验结果表明,与不含有D-RNA1的大田野生病毒以及低代次的继代接种WYMV相比,D-RNA1的存在使P.graminis传播WYMV并造成侵染的效率有所降低,病毒潜伏期延长,症状表现减轻。 因此推断,这种D-RNA1可能作为一种复制干扰因子,对WYMV的致病能力具有重要作用,并且能够影响到病毒被真菌传播的效率。