前言：　　 原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，被称为“癌中之王”。我国是肝癌发病率最高的国家之一。目前临床使用的化疗药物均有不同程度的毒副作用，从天然植物中寻找毒性低、疗效较高的抗癌活性成分，提高肝癌患者的生存率和生活质量非常重要。　　 鸢尾属(Iris)植物被广泛地作为民间传统中药，用来治疗癌症、炎症、细菌和病毒感染等。该属植物中存在大量异黄酮类化合物，其中鸢尾黄素为主要成分，其抗肿瘤活性已有报道。本课题组研究发现鸢尾黄素对实验性大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用，而临床注意到肝癌患者常有肝炎-肝纤维化-肝硬化-肝癌的发展过程。　　 因此，鸢尾黄素能否用于治疗肝癌值得探讨。　　 目的：　　 研究鸢尾黄素体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用并探讨其可能机理。　　 方法：　　 1、MTT法检测鸢尾黄素对HepG2、L-02细胞活性的影响；　　 2、试剂盒检测鸢尾黄素对HepG2细胞上清L，DH活性影响；　　 3、Hochest33342荧光染色观察鸢尾黄素处理后HepG2细胞形态的变化；　　 4、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的典型生化改变--DNA片段化；　　 5、Annexin V/PI双染流式细胞术对细胞凋亡定量分析；　　 6、荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平变化；　　 7、荧光染料Fura2-AM检测细胞内Ca2+浓度变化；　　 8、荧光染料罗丹明123检测细胞线粒体膜电位变化；　　 9、分光光度法检测caspase.3活性；　　 10、流式免疫荧光检测EGFR表达。　　 结果：　　 1、鸢尾黄素能有效抑制HepG2细胞活性，且有剂量、时间依赖关系。48 h其IC50为13.47μg/ml，与阳性对照在同一数量级；　　 2、鸢尾黄素对正常人肝细胞L-02抑制率在30％以内，即有一定选择性；　　 3、鸢尾黄素处理后，细胞上清LDH活性与对照无明显差异，只有当最大浓度40μg/ml才有显著差异；　　 4、鸢尾黄素处理后，细胞呈明显凋亡形态，有凋亡小体、核质碎片和浓缩出现；　　 5、鸢尾黄素处理后，细胞DNA条带呈梯状排列，是凋亡的典型生化指标；　　 6、鸢尾黄素处理后，细胞凋亡率显著增加，有剂量依赖关系，且随时间推移，逐渐从早期凋亡向中晚期凋亡转变；　　 7、ROS水平随鸢尾黄素浓度的升高而升高，且在短时间内呈显著差异，但随着作用时间的延长，又逐渐下降恢复到其本底值；　　 8、鸢尾黄素处理后，细胞内游离Ca2+浓度呈快速、持续升高；　　 9、鸢尾黄素能显著降低细胞线粒体膜电位，且在短时间内就出现；　　 10、鸢尾黄素能提高细胞caspase-3活性；　　 11、流式检测，鸢尾黄素可在一定程度抑制EGFR的表达。　　 结论：　　 1、鸢尾黄素能有效抑制HepG2细胞活性，且毒副作用较小。它诱导细胞凋亡，发挥体外抗肝癌作用。　　 2、鸢尾黄素处理HepG2细胞后，由于应激反应，短时间内出现ROS水平升高，同时刺激细胞Ca2+内流，使线粒体通透性增加，导致线粒体△Ψmt下降，可能通过释放细胞色素C，激活caspase级联反应，使DNA断裂，产生凋亡小体，导致细胞凋亡出现。即鸢尾黄素通过线粒体途径诱导细胞凋亡。　　 3、鸢尾黄素可在一定程度抑制EGFR的表达，推测其阻断EGFR介导的下游信号通路，进而诱导细胞凋亡，其深入的分子机制需进一步研究。