论文部分内容阅读
研究目的:探究雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路调控调节性T(Treg)细胞在IgG4相关性疾病(IgG4-RD)发病机制中的作用和不同血清IgG4水平患者的临床特征及预后特点。方法:第一部分:收集就诊于北京协和医院的初治和治疗稳定的IgG4-RD患者的外周血,并收集性别年龄相匹配的健康对照(HC)外周血,分离外周血单个核细胞(PMBC),采用流式方法检测Treg细胞及其TGFβ1和IL-10的表达百分比。收集HC及初治IgG4-RD病人血浆,采用ELISA方法检测血浆中IL-10的表达水平。采用磁珠分选技术,分选出HC和初治IgG4-RD患者的CD4+T细胞,提取RNA逆转录成cDNA、裂解细胞提取蛋白;采取RT-PCR技术检测PTEN、mTOR、TSC1、4EBP1、P70S6K的mRNA表达水平;采用Western Blot技术检测mTOR通路磷酸化PTEN(p-PTEN)、PTEN、p-mTOR、mTOR、p-4EBP1、4EBP1、p-P70S6K、P70S6K的蛋白表达水平。进一步采取流式技术检测HC和IgG4-RD的CD4+T细胞、Treg细胞上的p-PTEN、p-4EBP1表达水平。第二部分:纳入就诊于北京协和医院的初治IgG4-RD患者299例,根据基线血清IgG4水平将患者分为A组:血清IgG4正常;B组:血清IgG4水平大于1倍,小于等于2倍(1400-2800]mg/L;C组:血清IgG4水平大于2倍,小于等于5倍(2800-7000]mg/L;D组:血清IgG4水平大于5倍(>7000 mg/L),对其进行随访12个月,分析患者的临床特点、实验室指标、浆母细胞及治疗效果。结果:第一部分:初治IgG4-RD患者CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3-Treg的百分比明显高于HC(P=0.0356,P=0.023),治疗后均下降(未达统计学差异;P=0.0453),CD4+CD25+Foxp3+Treg三组无明显差异;Treg各亚型的IL-10表达无统计学差异;初治IgG4-RD患者CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3-Treg表面TGFβ1明显高于HC(未达统计学差异,P=0.0493),治疗后明显下降(P<0.0001,P=0.0013)。RT-PCR结果示初治IgG4-RD患者CD4+T细胞的PI3K、PTEN、TSC1在mRNA水平上明显低于HC(P<0.0001,P<0.0001,P<0.0001),治疗后上升,P70S6K、mTOR低于HC(P=0.0002,P=0.0003),4EBP1治疗后明显上升(P=0.0189)。Western Blot结果示初治IgG4-RD患者CD4+T细胞中p-PTEN、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表达明显高于HC(P=0.0172,P=0.0290,P=0.0194),其余无明显差异。流式方法检测初治IgG4-RD患者CD4+T细胞表达p-PTEN明显高于HC(P=0.0381),初治IgG4-RD患者CD4+T细胞和Treg细胞表达p-PTEN和p-4EBP1均高于HC(P=0.0016,P=0.0031)。IgG4-RD患者CD4+T细胞p-PTEN的MFI与血清IgG4呈正相关(r=0.6505,P=0.0465)。第二部分:颌下腺、泪腺、腮腺、胰腺、胆管和肺部受累的频率按照从A组到D组的顺序逐渐增加。随访12个月后,B组31例(68.9%)、C组43例(51.8%)、D组20例(12.7%)患者血清IgG4正常。D组血清复发率(19.4%)高于B组(4.9%)和C组(7.7%);B组和D组血清IgG4水平下降≥40%患者临床复发率明显低于IgG4水平下降<40%和上升的患者临床复发率(P=0.009;P=0.043)。结论:1.IgG4-RD患者的Treg及其分泌的TGFβ1明显高于HC,治疗后下降,表明Treg分泌的TGFβ1可能促进纤维化的进程;IgG4-RD患者血浆IL-10明显高于HC,并与多项反应病情活动的临床指标呈相关性。2.mTOR通路在IgG4-RD患者CD4+T细胞及Treg细胞高度活化,Treg细胞p-PTEN的MFI与血清IgG4呈正相关,提示mTOR通路可能通过调控Treg细胞参与IgG4-RD发病过程,mTOR通路有望成为IgG4-RD治疗的新靶点。3.血清IgG4水平越高的患者其泪腺炎、涎腺炎、自身免疫性胰腺炎的患病率越高,过敏史越高,而腹膜后病变和纵隔病变患者的血清IgG4水平较低。血清IgG4>5倍患者最易出现血清学复发,治疗后血清IgG4水平最难恢复正常水平。IgG4水平下降≥40%可能有利于降低血清IgG4高水平患者的临床复发率。