非甾体类抗炎药活化基因-1在胃癌中的表达及其真核表达载体的构建

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目的:1.研究非甾体类抗炎药活化基因- 1(nonsteroidal anti- inflammatory drug - activated gene-1 ,NAG-1)在胃癌组织中的表达及与胃癌临床病理特征之间的关系,探讨NAG-1在胃癌发生、发展和侵袭中的作用。2.构建NAG-1的真核表达载体pEGFP-N1/NAG-1,为体外研究NAG-1基因功能建立实验基础。方法:1.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测76例原发性胃癌患者癌组织及相应胃正常黏膜组织中NAG-1mRNA的表达;2.采用免疫组织化学S-P方法检测胃癌及正常胃粘膜组织中NAG-1蛋白的表达情况;3.以正常胃粘膜组织cDNA为模板,用RT-PCR技术扩增NAG-1基因片段,将该片段插入表达载体pEGFP-N1中,并通过蓝白斑实验、酶切、PCR和DNA测序刷选和鉴定阳性克隆。结果:1.正常组织和胃癌组织中均表达NAG-1mRNA,胃癌组织中的相对含量为0.5563±0.2181,显著低于胃正常组织的0.9059±0.0751(P<0.05)。高、中分化胃癌组织中的NAG-1mRNA相对含量为0.6701±0.1637,显著高于低、未分化胃癌组织的0.4005±0.1859(p<0.05)。不同浸润深度、有无淋巴结转移、不同临床分期的胃癌组织间NAG-1mRNA相对含量的差异均无统计学意义(p>0.05)。2.胃癌组织的NAG-1蛋白的表达程度显著于低于胃正常粘膜组织(X2=47.186 ,p=0.000<0.05)。细胞分化程度低的癌组织NAG-1蛋白表达程度显著低于分化程度高的癌组织(X2= 7.506,p=0.006<0.05)。不同性别、有无淋巴结转移、不同临床分期的胃癌组织间NAG-1蛋白表达程度的差异均无统计学意义(p值>0.05)。3.对阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序鉴定,证实NAG-1目的片段已正确插入表达载体。结论:1. NAG-1mRNA在胃癌组织中的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期无关,而与肿瘤的分化程度相关,提示NAG-1mRNA的表达程度影响胃癌的分化。2. NAG-1蛋白的表达与肿瘤分化程度相关,NAG-1蛋白质在胃癌组织中的表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期无关,提示NAG-1蛋白质的表达可能影响胃癌的分化。3. NAG-1mRNA在胃癌组织低于正常胃组织中的表达,NAG-1蛋白在胃癌组织中的表达明显低于它们在正常胃组织中的表达,提示NAG-1的表达改变可能与胃癌发生与发展有关。4.成功构建pEGFP-N1/NAG-1重组质粒,为进一步研究NAG-1基因功能建立实验基础。
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