特应性皮炎患者血浆中差异表达miRNA的筛选研究

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背景与目的:miRNA(microRNA)是一类长度为20~25个核苷酸的非编码小分子RNA,通过影响其靶基因的稳定性或抑制其翻译转录水平来调控细胞的分化、增殖和凋亡。目前现有的研究资料已证明miRNA在某些皮肤病的发生、发展起着重要作用,但是对其在特应性皮炎发病机制中所起作用的研究很少。本课题采用Exiqon公司的miRCURYLNATM芯片技术筛选特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)患者和正常人血浆差异表达的miRNA;然后通过RT-qPCR验证芯片检测结果的准确性,寻找与AD相关的血浆中特异性miRNA,冀望作为AD疾病诊断的标志物,研究结果为探明miRNAs调控特应性皮炎发生的机制,及今后研究其临床诊断、病情评估、治疗评价提供理论指导和实验依据。材料与方法:收集9例AD患者及6例正常人外周静脉血5ml,无酶污染条件下提取总RNA,利用Exiqon公司的miRCUPY LNATM基因芯片对血浆中的miRNA进行筛查、分析。对特应性皮炎中的差异表达miRNA进行筛选,初步建立特应性皮炎患者miRNA异常表达谱,找出明显上调或下调表达的miRNA进行进一步的PCR验证和分析。结果:1.在特应性皮炎患者血浆中筛选出上调表达的miRNA基因105个,下调表达的miRNA基因225个。2.其中Fold chang上调大于2倍的为61个,上调大于3倍小于5倍为17个,上调大于5倍的为5个; Fold chang下调小于0.5倍的为170个(P<0.05)。结论:1.初步建立特应性皮炎患者血浆中的miRNA基因的异常表达谱,与正常健康人比较,初步筛选出61个上调表达的miRNA基因和170个下调表达的miRNA基因。2.通过查阅文献结合本研究实验,最后选取在特应性皮炎血浆中显著性差异表达的miR-142-5p、miR-1237-3p和miR-4275、miR-5047进行后续RT-qPCR验证、分析。
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