目的：原发性血小板减少性紫癜（ITP）是一种自身免疫性疾病，目前的研究显示免疫和内分泌的异常共同构成了发病的重要环节。鉴于本病西医尚无根治手段，寻求有效低毒的治疗方法成为中医领域的努力方向。原发性血小板减少性紫癜属中医学“血证”范畴，肝失疏泄以致气血失调、肝脾不和、瘀血内阻为本病的主要病机，现代研究表明肝主疏泄与内分泌-免疫网络有着极为密切的关系，针对病机和病理特点，我们确立“从肝论治”的治疗原则和“和肝化瘀”的治疗大法，选用《伤寒论》小柴胡汤加活血化瘀药组成加味小柴胡颗粒作为治疗原发性血小板减少性紫癜的主方。本研究的目的通过理论研究、临床试验和动物实验，从内分泌-免疫的角度探讨加味小柴胡颗粒对原发性血小板减少性紫癜的作用机理。方法：1．临床试验以60例原发性血小板减少性紫癜患者为观察对象，随机分为观察组30例和对照组30例，观察组予加味小柴胡颗粒联合泼尼松，对照组单用泼尼松治疗，通过建立疗效标准、临床症候评分标准和激素副反应评定标准，观察近期疗效、6个月后的远期疗效以及平均起效时间、激素开始减量时间、临床症候改善率、激素副反应发生率等指标来分析评价加味小柴胡颗粒的临床疗效和安全性。2．实验研究分药效研究和机理研究两部分。选择ITP小鼠模型作为实验对象，通过观察血小板计数、骨髓巨核细胞、T细胞亚群、血小板抗体、糖皮质激素受体、皮质酮等指标探讨加味小柴胡颗粒对ITP模型小鼠的药效和对内分泌-免疫的作用机理。（1） ITP模型小鼠制作：采用注射豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）建立小鼠免疫性血小板减少性紫癜模型，按照100ul／10克体重于腹腔注入1：4稀释的抗血清。造模第6小时，血小板开始下降，到8小时降至最低。分别于第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19天注射抗血清以维持血小板持续在低水平。造模第7天开始分组给药。（2）急性毒理实验：加味小柴胡颗粒按最大浓度、最大容积一次灌胃给药，剂量为98g生药／kg体重，小鼠未见死亡或其他明显异常表现，表明加味小柴胡颗粒毒性较低，无法测出LD₅₀，改做一日内多次给药最大给药量实验。（3）对ITP模型小鼠的药效：于造模前及给药前、给药后4天、给药后7天、给药后14天用血细胞计数仪测各组小鼠外周血血小板数，取小鼠股骨骨髓，显微镜下观察骨髓巨核细胞计数和分类，断尾法测出血时间，分别探讨激素干预前后加味小柴胡颗粒对原发性血小板减少性紫癜的药效。（4）对ITP模型小鼠内分泌-免疫系统的影响：采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测各组小鼠外周血血小板相关抗体，流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群，放射免疫法（RIA）测定外周血细胞因子，放射配体结合分析法测定并求出小鼠脾细胞糖皮质激素受体（GR）位点数，RT-PCR法测定糖皮质激素受体转录基因（GRmRNA）表达，明确内分泌-免疫异常在原发性血小板减少性紫癜发病中的意义及加味小柴胡颗粒的干预作用。（5）对激素干预后ITP模型小鼠增效减毒作用：测激素干预后ITP小鼠GR、GRmRNA水平，放射免疫法（RIA）测小鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）、血浆皮质酮（CORT），明确激素对原发性血小板减少性紫癜内分泌的影响和加味小柴胡颗粒的调节作用。结果：1、临床试验：观察组疗效优于对照组（R＜0.05）；观察组平均起效时间9.7±3.6天，对照组平均起效时间11.5±3.7天（P＞0.05）；观察组激素开始减量时间26.4±3.6天，对照组激素开始减量时间28±3天（P＞0.05）；6个月后血小板仍大于50×10⁹的病例观察组占56.67％，对照组占26.67％（P＜0.05）；观察组副反应发生低于对照组（P＜0.05）。提示加味小柴胡颗粒能提高激素疗效，缩短激素起效时间和减量时间，延长有效期和减少副作用发生。2、实验研究：（1）急性毒理实验：小鼠对加味小柴胡颗粒的最大耐受量在临床正常用量的194倍以上，说明该药无明显毒理反应，是安全可靠的。（2）对ITP模型小鼠的药效：激素干预前显示，ITP模型小鼠血小板计数持续下降，出血时间延长，骨髓巨核细胞数增多，产板巨减少，与正常组比较有差异（P＜0.05），加味小柴胡颗粒能提升血小板、缩短出血时间，使巨核细胞减少，产板巨增多，与正常组比较有差异（P＜0.05），并优于于维血宁组（P＜0.05）。激素干预后显示，加味小柴胡颗粒激素组的作用优于单用激素组（P＜0.05）。（3）对ITP模型小鼠内分泌-免疫系统的影响：ITP模型小鼠血小板抗体水平上升；CD8升高，CD3、CD4、CD4／CD8下降；白细胞介素-2下降，白细胞介素-10升高，脾细胞糖皮质激素受体及其转录基因水平下降，与正常组比较有明显差异（P＜0.05）。加味小柴胡颗粒对小鼠血清CD3、CD4、CD4／CD8、白细胞介素-2有上调作用，对小鼠血小板抗体、血清CD8、白细胞介素-10有下调作用，对脾细胞糖皮质激素受体及其转录基因有明显上调作用，与模型组比较有明显差异（P＜0.05）。提示ITP模型小鼠内分泌-免疫异常，加味小柴胡颗粒有调节作用。（4）对激素干预后ITP模型小鼠的增效减毒作用：激素组脾细胞糖皮质激素受体及其转录基因水平下降的同时肾上腺指数、血浆促肾上腺皮质激素、血浆皮质酮下降，与模型组比较有明显差异（P＜0.05）。加味小柴胡颗粒激素组均有上调作用，与激素组比较有明显差异（P＜0.05）。提示ITP经激素干预后出现糖皮质激素受体及其转录基因水平的进一步下降和下丘脑-垂体-肾上腺轴功能的减退，而加味小柴胡颗粒有调节作用。结论：1、临床试验：联合应用加味小柴胡颗粒和泼尼松治疗原发性血小板减少性紫癜可以提高临床疗效，延长有效期，缩短起效时间和激素减量时间，降低激素副作用。2、实验研究：加味小柴胡颗粒能明显提升ITP模型小鼠血小板计数，促进骨髓巨核细胞成熟，抑制血小板抗体，调节T淋巴细胞亚群及其分泌的细胞因子，上调糖皮质激素受体及其转录基因mRNA，保护下丘脑-垂体-肾上腺轴功能，且无明显毒理反应。3、临床和实验研究表明，加味小柴胡颗粒对原发性血小板减少性紫癜有良好的治疗效果，对激素具有增效减毒效应，推测可能与其调节内分泌-免疫有关。