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目的:研究观察间歇性低氧对小鼠非酒精性脂肪肝形成的影响及其机制,为临床预防和治疗非酒精性脂肪肝探索新的方法和途径。方法:1、采用高脂高糖饮食诱发小鼠非酒精性脂肪肝模型;以肝细胞AMPK活性为评价指标,筛选和确定低氧(15%)环境的刺激的作用和起效时间;常规病理学方法判定病变程度,对比观察间歇性低氧和二甲双胍对小鼠非酒精性脂肪肝病理学进程的影响;2、实验分组与步骤:(1)高脂高糖诱发脂肪肝模型的复制:封闭群Km雄性小鼠30只,随机分为正常对照组和高脂高糖模型组,每周测量体重变化及肉眼观察肝脂肪变程度,直至模型成功;(2)15%低氧环境刺激的起效时间筛选:Km雄性小鼠25只,随机分成5组,普通饲料喂养。低氧1 h组、低氧2 h组、低氧4 h组、正常对照组和二甲双胍对照组。三个低氧组置氧浓度为15%环境中分别刺激1 h、2 h、4 h,二个对照组置常氧环境普通饲料喂养至实验结束,麻醉处死后Western blotting检测肝脏AMPKa活性,筛选确定低氧干预的起效时间。(3)间歇性低氧干预对小鼠非酒精性脂肪肝病理进程的影响:Km雄性小鼠48只,随机分为4组,A.空白对照组、B.高脂高糖模型组、C.低氧干预组、D..二甲双胍对照组,每周1次称量并记录体重变化。除A组普通饲料常氧饲养外,B、C、D三组均全程高脂高糖饲料喂养。第5周起,B组每天1次暴露于21%常氧环境中1 h,C组每天一次暴露于15%低氧环境中1 h,D组每天1次腹腔注射二甲双胍(100mg/kg体重/d),常氧饲养。第8周末麻醉处死动物,采取血液和肝组织标本,分别检测血糖、肝功能指标变化及制作肝组织HE染色切片和常规病理学观察。结果:1、采用高脂高糖饮食诱导4周,成功复制小鼠非酒精性脂肪肝模型;2、置15%低氧环境1 h即可激活肝P-AMPKa活性,确定为后续实验条件;3、间歇性低氧对小鼠非酒精性脂肪肝进程的影响:(1)常规病理学观察结果:A组无肝脂肪变,C、D组有轻中度脂肪变,B组有严重脂肪变,B组与C、D两组比较均有显著性差异(P<0.05),但C、D两组间差异不明显,提示间歇性低氧有效减缓了非酒精性脂肪肝的病理进程。(2)肝功能检测结果:血清ALT值:与A组比较,C、D组均轻度升高,B组显著性升高(P<0.05);与B组比较,C、D二组均降低,差异均有显著性(P<0.05);而C、D两组间比较,差异无显著性;血清AST值:与A组比较,C、D二组轻度升高,B组最高;B组与A、C、D三组比较差异均有显著性意义(P<0.05),但是A、C、D三组间两两比较,差异无统计学意义。表明间歇性低氧明显降低了高脂高糖饮食所致的肝功能损害。(3)平均体重变化:A组随时间正常增长,B组增长极其缓慢,C、D组介于A、B组之间;第5周起,A组、B组分别与C、D两组的比较差异逐周加大,至第8周最大,差异均有显著性意义(p<0.05);C、D两组的变化一直相近,两组间比较无明显差异。(4)血糖、血脂检测结果:空腹血糖值:A组最高,C、D组次之,B组最低,A组与B、C、D三组比较差异均有显著性(P<0.05),但C、D组之间比较无明显差异。血清TG:B、C、D三组均较A组高,与A组两两比较均有统计学差异(P<0.05),但B、C、D三组之间比较差异无统计学意义。血清TC值:与A组相比,B组升高、C、D二组最高,差异均有显著性意义(P<0.05),但C、D两组之间比较无明显差异。结论:1.高脂高糖饮食可诱发小鼠非酒精性脂肪肝,该脂肪肝模型具可逆性;2.间歇性低氧能有效延缓小鼠非酒精性脂肪肝的病理进程,减轻肝功能损害,改善体重增长和空腹血糖水平。3.间歇性低氧抗脂肪肝的作用机制可能与二甲双胍相似,均能激活肝脏AMPKa的活性,具备潜在的临床应用前景。