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近年来因人工流产而导致的妇科不正常出血病例和因为不正常出血伴随的细菌感染而产生的炎症,严重威胁着妇女的生命健康。至今每年约有1亿人次的妇女急需功效快速的妇科止血消炎药,但目前尚无此类妇科特效药。因此,临床上迫切需要高效、低毒、选择性高的新型止血化瘀、抗菌消炎药物。滇桂艾纳香是妇科止血壮族药用特色植物,也是广西特色名优中成药“妇血康”的唯一原料,在妇科疾病方面发挥着重要作用。但目前针对滇桂艾纳香的研究,主要还集中在其成分的分离和鉴定上,对于其单体成分血液活性研究较少。本课题组前期研究工作表明,对羟基肉桂酸作为滇桂艾纳香中的一种活性成分,具有较好的血液生理活性,并对小鼠离体子宫具有兴奋的作用。滇桂艾纳香中的酚酸性物质,虽然具有较好的血液生理活性,但是活性强度不够。本课题在前期研究的基础上,选择对羟基肉桂酸以及类似物为原料,以芳香胺、脂肪胺以及具有抗菌活性的磺胺类药物作为合成子,合成系列的酰胺化合物。具体内容如下:1.以对羟基肉桂酸、间羟基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸、间甲氧基肉桂酸、咖啡酸和绿原酸为原料,在现有止血药物结构特征的启示下,与系列的芳香胺、脂肪胺以及磺胺类药物反应,一共合成70个化合物,用IR、1H-NMR、13C-NMR、MS及X-ray单晶衍射对合成的衍生物进行结构表征。2.用凝血四项指标对化合物的血液活性进行筛选,初步筛选发现化合物 1,2,3,4,5,6,27,28,31,32,41,42,43在测试的三个浓度范围内0.0625,0.125和0.25 mg/mL)具有一定的促凝活性;35和36则具有抗凝活性。化合物33,34,54,55,56,57则表现了在低浓度促凝,在高浓度抗凝的活性。化合物35,57,54,58,55,56,49,60,68,36,48,39,62和 63在0.125mg/mL浓度时显著延长TT凝血时间,分别比空白组延长了 120%,123%,44.9%,50.67%,36.03%,33.33%,19.08%,19.46%,15.15%,15.99%,比阳性对照化合物70(云南白药,延长14.77%)延长的时间要长,说明该类化合物对凝血酶或纤维蛋白的聚合有很强的抑制作用。在低浓度时,对和间位羟基肉桂酸形成的化合物对FIB的影响比较大。3.将筛选出来具有较好血液生理活性的化合物进行血浆复钙实验,研究发现,对于肉桂酸系列的化合物,35和28在测试浓度范围之内主要表现抗凝活性,化合物31和58只表现促凝活性,57号产品则表现低浓度促凝,高浓度抗凝。其余的化合物在不同的浓度区间则表现出不同的活性。化合物 1,2,4,5,6,43主要表现促凝活性,3,35,27,28,33,41,42,54,55和59主要表现出抗凝活性。咖啡酸系列的化合物,都表现出了较好的双向活性,即在低浓度促凝,在高浓度抗凝,其中绿原酸邻甲苯酰胺(68)在高浓度抗凝活性最好,抗凝抑制率达到73%。4.将通过筛选出的血液活性较好的化合物进行抗菌实验测试,受试菌种为沙门氏菌、白色念珠菌、肺炎球菌和金色葡萄糖球菌。实验结果显示,其中36,37对四种菌的的抑制效果最好,其中37号样品对白色念珠菌、金色葡萄糖球菌和肺炎球菌的最低抑菌浓度可达0.078 mg/mL,对沙门氏菌的最低抑菌浓度为0.156 mg/mL。36号的MIC均在0.3125 mg/mL～1.25 mg/mL之间。57号对沙门氏菌、白色念珠菌、金色葡萄糖球菌的MIC则为2.5 mg/mL,对肺炎球菌的MIC则大于10 mg/mL。32号则对白色念珠菌和金色葡萄糖球菌有着很好的抑制作用,MIC分别为0.3125和2.5 mg/mL。5.将前面几步筛选得到的化合物进行小鼠离体子宫实验,了解化合物在止血过程中对组织因素(小鼠离体子宫的频率和张力)的影响。研究发现37和39号化合物加入后,在浓度为2.49×10-5 mol/mL和4.98×1O-5 mol/mL时较给药前小鼠离体子宫频率有较大幅度的减小(P<0.05),具有抗凝血活性。1和4号化合物的加入,都使得小鼠离体子宫收缩频率增加,说明化合物有兴奋子宫的作用,具有一定的促凝活性,但无显著性意义。化合物36在浓度19.61×10-5 mol/L时,加药后比加药前强度下降,具有显著性差异(P<0.01),其余化合物的小鼠离体子宫平均张力在给药前、后差别无统计学意义。4,35和57在低浓度时有稍微增加平均张力外,化合物的其余浓度以及其它的化合物的各个浓度,在测试浓度范围之内,张力都是相对加药前减小。说明化合物在一定的浓度内具有抗凝的效果。6.为了更好的了解具有较好血液生理活性以及抗菌活性的化合物在体内的结合和运输情况,将筛选出的化合物1(促凝和抗菌)、35(抗凝)、36(抗凝和抑菌)及57(双向调节和抗菌)与HSA进行作用,通过加入化合物前后的荧光强度变化计算,推测出化合物与蛋白质的结合模型为静态猝灭,化合物与HSA都以1:1的方式结合;同时,结合距离都小于8nm,说明结合过程发生非辐射能量的转移;在化合物-HSA体系中,氢键、输疏水相互作用和范德华力对化合物与HSA的结合起主要作用。同步荧光光谱表明,化合物的加入,对HSA络氨酸和色氨酸氨残基微环境都有影响。