目的:探究有效的脱细胞方法处理羊颈内动脉,用于制备组织工程小口径血管。方法:通过两种不同的脱细胞方法处理羊颈内动脉,制备脱细胞小口径血管支架,进行组织学及理化性质测量。方法:将羊颈内动脉分为三组。A组:新鲜组即对照组。B组:酶法脱细胞组(实验组I):将羊颈内动脉用0.25%胰蛋白酶无菌磷酸缓冲盐(PBS)溶液脱细胞处理120h;C组:酶与去污剂混合脱细胞组(实验组II):将羊颈内动脉用0.25%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、0.25%脱氧胆酸钠盐、0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)无菌磷酸缓冲盐(PBS)溶液脱细胞处理72h,然后用0.1g/LRNA酶、150IU/LDNA酶、0.05Mol/L Mg C l2去除核酸48h。将三组血管进行HE染色、弹力纤维染色、胶原纤维染色、免疫荧光染色、电镜观察。对理化性质如厚度、拉力强度、承受压力值、含水量、DNA含量进行测量。厚度、拉力强度、承受压力值、含水量、DNA含量数据用SPSS软件进行统计学分析,采用平均值±标准差的方式表示,并进行单因素ANOVA检验,取P<0.05为有统计学意义。结果:理化性质:厚度:A组>C组>B组,且任意两组之间P值均小于0.01,任意两组厚度均具有统计学差异。拉力强度:C组>B组>A组。B组与C组间P>0.05(P=0.690),B组与C组无统计学差异;A组与B组间P>0.05(P=0.089),A组与B组无统计学差异;A组<C组,且P<0.05(P=0.039),A与C间有统计学差异。三组均可承受300mm Hg压力值;含水比值:B组>A组>C组,任意两组之间P值均小于0.01,任意两组间含水比值均具有统计学差异。DNA含量:A组>B组>C组,A组大于BC两组,P值均小于0.01,A组与BC组的DNA含量均有统计学差异(P均小于0.01);B组与C组P=0.396,无统计学差异。组织学观察:A组可见细胞核及弹力纤维、胶原纤维组织,纤维组织排列紧密整齐;B组未见细胞核,可见弹力纤维及胶原纤维,排列松散错乱并出现断裂;C组未见细胞核,可见弹力纤维及胶原纤维比较致密,排列整齐,无明显断裂。免疫荧光染色观察:A组可见蓝色颗粒状的细胞核与红色线状的纤维,纤维整齐致密;B组,未见蓝色颗粒状的细胞核,可见红色的纤维,杂乱,且比C组更松散;C组,未见明显的细胞核,可见红染的纤维组织,整齐,较松散。电镜观察:A组可见内膜表面有排列整齐的内皮细胞,B组可见内膜有排列整齐的纤维组织,未见细胞样结构,C组可见内膜有排列整齐的纤维组织,未见细胞样结构。结论:1.酶法和去污剂-酶混合法均可以去除血管壁中的细胞,并对血管固有组织造成损伤。2.去污剂-酶混合法脱细胞程度高,DNA含量少,对血管固有组织损伤小,是制备组织工程小口径血管材料的较好的方法。目的:探究嵌合型组织工程小口径血管的制备方法以及合适的动物模型,将制备好的嵌合型血管移植入动物体内,观察并分析,为组织工程小口径血管提供新的思路。方法:一:实验血管的制备及理化性质、组织学检测。通过去污剂-酶混合法处理羊颈内动脉,获得脱细胞小口径血管支架后,进行明胶填充及交联,制备嵌合型组织工程小口径血管,进行组织学及理化性质测量。处理步骤:将羊颈内动脉血管分为三组:A组(新鲜组即对照组):新鲜羊颈内动脉,B组(脱细胞组):将羊颈内动脉用0.25%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、0.25%脱氧胆酸钠盐、0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)无菌磷酸缓冲盐(PBS)溶液脱细胞处理72h,然后用0.1g/LRNA酶、150IU/LDNA酶、0.05Mol/L Mg Cl2去除核酸48h;C组(嵌合组):脱细胞及去除核酸方法同B组,然后进行明胶回填,用水溶性1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联。观察指标:理化性质:对三组血管进行厚度、拉力强度、含水量、爆破强度等性质的测量,数据用均值±标准差表达,用SPSS.18.0进行单因素ANOVA检验,以P<0.05为有统计学意义。组织学观察:对三组血管进行HE染色、弹力纤维染色、胶原纤维染色、电镜观察。根据上述理化性质、组织学特性对三组血管进行术前评价。二:动物模型的建立及术后血流动力学检测。将成年雄性新西兰大白兔(2-2.5kg)18只随机分为三组。甲组(新鲜组):将A组血管植入兔体内;乙组(脱细胞组):将B组血管植入兔体内;丙组(嵌合组):将C组血管植入兔体内。三组均采用腹正中切开术,三组血管均行腹主动脉旁路移植术,术后根据远近吻合口之间的距离,切断或结扎腹主动脉。术后24小时内,实验动物无死亡且无下肢瘫痪为模型成功,并于术后24小时进行兔腹主动脉多普勒超声检查,记录桥血管直径、吻合口径、波峰流速、波谷流速。三:动物实验后血管组织学、免疫组化检测。观察动物存活情况,于术后四周取出桥血管,进行肉眼观察、组织学、免疫组化检测。包括:HE染色、弹力纤维染色、胶原纤维染色、CD4、CD8、CD68、CD31、层粘连蛋白(laminin)和平滑肌肌动蛋白标志物(SMA)。结果:一:实验血管的制备及理化性质、组织学检测。理化性质:厚度:A组>C组>B组,B组、C组均小于A组,具有统计学意义(P均小于0.01),C组厚度大于B组,无统计学意义(P=0.322);拉力强度:C组>B组>A组,B组、C组均大于A组,具有统计学意义(P均小于0.05),C组拉力强度大于B组,无统计学意义(P=0.079);含水量:A组>C组>B组,具有统计学意义(P均小于0.01)。爆破强度:三组血管均可以承受300mm Hg的压力。组织学观察:A组可见细胞核及弹力纤维、胶原纤维组织,纤维组织排列紧密整齐;B组未见明显的细胞核,可见弹力纤维及胶原纤维,纤维纤细,断裂,较整齐;C组未见明显的细胞核,可见弹力纤维及胶原纤维,纤维连续呈网状,比B组略粗,松散,纤维之间存在间隙。电镜观察:A组可见内膜表面有排列整齐的内皮细胞。B组内腔纤维组织裸露,排列整齐,有明显的凹凸样结构及孔隙,未见细胞样结构,C组内腔见纤维组织裸露减少,排列整齐,表面光滑,无明显缝隙,未见细胞样结构。二:动物模型的建立及术后血流动力学检测。术后24小时内径:A组>B组>C组,B组与A组均大于C组,具有统计学意义(P均小于0.05),A组大于B组,无统计学差异(P=0.175)。术后24小时前后吻合口内径:三组间均无统计学差异(P均大于0.05)。术后24小时收缩期峰值流速:A组<B组,有统计学差异(P<0.05);A组、B组与C组均无统计学差异(P>0.05)。术后24小时舒张末期流速:三组均无统计学差异(P均大于0.05)。术后24h阻力指数、搏动指数:A组>B组>C组,C组与A组具有统计学差异(P均小于0.05),A组、C组与B组均无统计学差异(P均大于0.05)。三:动物实验后血管组织学、免疫组化检测。组织学观察:三组均可见细胞核及弹力纤维、胶原纤维组织,A组、B组可见明显的血栓附着于内壁,C组未见明显血栓。电镜观察:新鲜组与脱细胞组内膜粗糙,交联组可见内膜光滑。免疫组化:血管CD4、血管CD8、血管CD68:A组>B组>C组,三组间的差异均有统计学意义,P均小于0.05。血管CD31:A组<B组<C组,C组及B组均高于A组,差异具有统计学意义(P均小于0.01);C组高于B组,差异无统计学意义(P=0.142)。血管laminin:A组<B组<C组,三组间的差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。血管SMA:A组<B组<C组,C组及B组均高于A组,差异具有统计学意义(P均小于0.01);C组大于B组,差异无统计学意义(P=0.066)。结论:1.混合法及嵌合法处理小口径血管均会对血管造成损伤,其中嵌合组理化性质与新鲜组血管接近。2.嵌合型组织工程小口径血管具有良好的血流动力学及术后通畅率。3.嵌合型小口径血管可以吸引平滑肌干细胞及内皮细胞的附着,有良好的生物相容性及较低的免疫原性,可以为组织工程小口径血管提供新的思路。