目的:优化NK细胞培养体系,提高NK细胞在体外培养的效率,检测不同培养体系NK细胞对乳腺癌细胞T47D体外杀伤效果。本文为NK细胞在肿瘤过继细胞免疫治疗的临床应用提供了理论与实践依据。方法:采集健康人静脉全血,分离出外周血单个核细胞,通过添加不同的细胞因子与添加ErbB2抗体的培养体系进行NK细胞培养,实验分为NK1组(培养基中含IL-2)、NK2组(培养基中含IL-2,IL-15和IL-21)、和NK3组(ErbB2抗体包被后培养基中含IL-2)三组。分别将培养第0天、7天和第14天的NK细胞进行流式分析检测CD3、CD4、CD8和CD56分子表型,检测不同培养时期NK细胞的比率。将培养14天后的三组培养体系的NK细胞分别以效靶比5:1、10:1、20:1分别和T47D细胞共同培养,用CCK-8法进行体外肿瘤细胞杀伤实验。结果:第7天时流式结果显示:NK3组与NK1及NK2组细胞相比,NK细胞比率开始有显著升高(P<0.05),NK1与NK2组相比无显著性差异(P>0.05);第14天时三组细胞相比,NK3组中NK细胞比率与NK1及NK2相比升高,有显著性差异(P<0.05)。经离心收集NK细胞并调整细胞浓度,分别以效靶比5:1、10:1、20:1与T47D共培养24小时后,以CCK-8法检测细胞存活率,NK3组NK细胞对T47D的细胞的杀伤活性最高,与NK1及NK2组相比均有显著性差异(P<0.05)。结论:经不同的方案诱导培养NK细胞,结果显示添加了ErbB2抗体的培养组,NK细胞的比率显著高于其它培养体系培养的细胞;并且添加了ErbB2抗体诱导培养体系培养出的NK细胞对乳腺癌细胞T47D的体外杀伤效果显著优于其它各组。