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喜树碱(CPT)和10-羟基喜树碱(HCPT)是喜树中含有的天然抗肿瘤活性成分。由于HCPT的抗肿瘤效果比CPT。好,且毒性较低,因此越来越受到人们的重视,成为继紫杉醇后国际市场上的又一新的抗癌药物,并成为喜树碱类衍生物研究的重要中间体。HCPT在喜树种子内的天然含量仅为十万分之一左右,寻找有效的方法对CPT进行结构修饰和改造,从而获得活性更强的HCPT成为了研究热点。
目前,微生物转化己成为天然产物结构修饰和改造的有利工具,它是利用生物代谢过程中产生的酶对外源性物质进行结构修饰和改造的化学反应。与化学方法相比,它具有选择性高、条件温和、无污染、成本低和副产物少等优点,可以完成一些用化学方法难以进行的反应。
本文选用多种微生物对CPT的微生物转化进行研究,采用薄层层析(TLC)法和高效液相色谱(HPLC)法对转化产物进行分析,筛选具有CPT微生物转化能力的优良菌株,并对优良菌株的微生物转化工艺条件进行了研究,主要研究结果如下:
(1)从14种微生物中筛选得到三种对CPT具有生物转化能力的菌株,分别为毛霉、禾谷镰刀菌和假单胞菌(B1x);其中毛霉和假单胞菌(B1x)转化效果较好,在未优化条件下,转化率分别为10.6%和17.7%。
(2)优化得到毛霉转化CPT的工艺,最佳培养基的组成为葡萄糖2.5%、玉米浆2.5%、酵母膏0.3%;转化条件为接种量5%(菌悬液浓度为5×10<8>)、转化时间96h、培养和转化温度30℃,转化初始pH值6.0、装液量40mL、摇床转速140rpm和底物转化浓度0.15g/L,在加入底物转化前30h时进行诱导有利于转化率的提高,优化后CPT的转化率为14.3%。
(3)优化得到假单胞菌B1x转化的工艺,最佳培养基组成为牛肉膏0.7%、蛋白胨1.0%和NaCl 0.5%;转化条件为转化时间60h、转化温度28℃,转化初始pH6.5、装液量50mL、摇床转速160rpm和底物转化浓度0.1g/L,转化前16h时进行诱导有利于转化率的提高,优化后CPT的转化率为19.1%。