论文部分内容阅读
前言 全麻原理是麻醉学最重要的基本理论之一,但全麻药作用的确切机制至今不明。一般认为吸入全麻药的作用机制较为复杂,其中可能包涵静脉全麻药的作用机制。不管吸入全麻药宏观和微观水平的作用部位如何,现在可以肯定分子水平的作用部位是在神经细胞膜。越来越多的证据表明吸入麻醉药发挥效应的部位是细胞膜上的离子通道。 在诸多的离子通道中,麻醉药对n-乙酰胆碱受体(nAChR)和r-氨基丁酸A受体(GABA_AR)通道影响的研究最多,因实验条件和药物剂量等因素不同,研究结果不一。一般认为nAChR通道不是全麻药作用的主要靶位。尽管GABA_A受体通道是大家公认的全麻药主要靶位之一,在其临床麻醉浓度主要增强GABA对该受体通道的效应,但已发现许多用对该通道作用不能解释的现象,故全麻药对其它兴奋性离子通道的作用已受到重视。在中枢神经系统(CNS)主要的兴奋性离子通道中,钠通道为主要的兴奋性电压门控型离子通道,是可兴奋细胞产生动作电位及传导神经冲动的关键部位和决定因素,虽以前的实验发现枪乌贼巨轴突模型的钠通道对全麻药不敏感,但后来的研究证明临床浓度的全麻药对鼠脑钠通道、肺泡Ⅱ型细胞钠通道及心肌细胞钠通道都有显著的抑制作用,且遵循Meyer-Overton规则。因此,全麻药对脑钠通道的影响以及此影响在全麻中的地位值得研究。本课题分三部分研究异丙酚(静脉麻醉药)、异氟醚(吸入麻醉药)和利多卡因(局部麻醉药)对急性分离的CNS钠通道的影响。 第一部分 异丙酚对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响 材料和方法 选用10*4d SD大鼠,雌雄不拘,体重20-309,由徐州医学院实验动物中心提供。将实验大鼠快速断头,置于0-4℃氧饱和的人工脑脊液(ACSF)中分离出海马,手工切成约500pm厚的脑片。将脑片放人孵育槽中用 ACSF漂浮孵育 60加n,连续通以 95% O。+5呢 CO。维持 pH在 7·35-7.40。采用H步酶消化法,分别用 10 InL的 ACSF配成 0.05%的 TyPsin和0.05%的Pronase,相继在孵育精内酶解根2℃,各30 min人酶解后的脑片冲洗2次后继续用ACSF孵育。实验时每次取二片脑片放人盛有ACSF约1InL的小玻璃杯中,先后用尖端热处理的直径为400 pm和150pm左右的Pasteur吸管轻轻吹打,经400目钢网过滤到细胞灌流槽内,放在倒置显微镜上静置15-20min让细胞贴壁,用细胞外液灌洗3次后作全细胞膜片钳记录。 在显微镜下选择合适的锥体神经元作为实验对象,用硬质有芯玻璃毛坯管二步拉制记录电极,用微电极操纵器将电极缓慢推向细胞,当电极尖端贴住细胞膜后轻轻吸引使之封接,当封接阻抗大于 IGfl时,负压破膜,补偿电容电流和串联阻抗形成全细胞状态。用EPC—9膜片钳放大器在室温(24-26T)下记录钠电流,电刺激脉冲的输出及电信号的采人均通过计算机由商用软件Pulse 8.02来完成,经数字化处理后贮存于计算机硬盘。 实验分为7组,异丙酚h,Pro)按加人在细胞外液中的浓度广0、30、50、100Pmol/L)对应分为Pro;。组、Pro。。组、u。组和PrO;。组,目肪乳剂Ontralwid,Iry)按 PrO。。组和 Pro;。组同样的浓度对应为 ILPw组和 ILP;。组,对照组灌流给药时仍用细胞外液。每组6个细胞,分别记录给药前、给药后2 dn及冲洗后2 dn的钠通道电流变化。抑制程度以最大内向电流的减少来计算,用与基础对照值的百分比表示。 ·2· 结 果 对照组*LPro组和 ILPl。组的峰钠电流下降率分别为 4.二 L 3.2%3.7士46%和中3土3.二邮,差别无显著性意义(P>o.05*异丙酚抑制峰钠电流的程度与浓度呈正相关k=0·993,P<o.0*,PrO;。组、u。组、u。组和u;。组分别抑制峰销电流为14.4。8.7%(P<0.05)、43·2 t 8·8防(P<0.0且)、67.2士二8.二例P<o*二)和85.二土二一9%(P<o*二),1q为3二.5卜mOVL。‘ 讨 论 哪药对中枢神经钠通道的影响虽有研究报道,但使用的都是人工表达的血AJ型脑钠通道,缺乏p亚单位的调节作用。我们采用酶消化法,急性分离出来的含有完整钠通道的大鼠海马锥体神经元的峰钠电流(平均3-4nd)比人工表达的D A-1型细胞(平均1-ZnA)的大,阈电位和峰电位也比人工表达的细胞更负,提示分离细胞的钠通道更完整、功能钠通道更多、激活和失活更迅速。与 Isom LL等报道的 p;亚单位可加速钠通道的激活和失活,在快速反应的哺乳细胞上复合表达了p;亚单位的铀通道可使其功能钠通道。亚单位的数目增加2-4倍、并使激活和失活向更负的膜电位转移的结果相吻合,表明本实验模型更能完整的代表整体动物脑神经元的铀通道。 异丙酚是一种脂溶性的药物,有实验报道溶解异丙酚的脂肪乳剂对心肌细胞的收缩功能有一定的影响。本实验结果证实脂肪乳剂对铺通道电流无明显影响,表明异丙酚对海马神经?