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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)在微生物分类学上属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌的代表,也是人类的一种重要病原微生物。金黄色葡萄球菌检验是药品、保健品、化妆品、食品的重要检验项目。金黄色葡萄球菌检验,分为法定检验和快速筛选。法定检验常用标准都需以兔血浆进行血浆凝固酶试验确证结果,由于兔血浆质量稳定性和可控性较差,检验人员的视觉误差,血浆凝固酶实验常会发生假阴性和假阳性；开发ELISA检测方法能提高血浆凝固酶实验的灵敏度和特异性,ELISA检测方法也可直接用于金黄色葡萄球菌快速筛选。论文研究以灭活的金黄色葡萄球菌为抗原免疫新西兰大白兔,获得了效价为1：4000的血浆凝固酶兔抗血清；同时免疫豚鼠,获得了效价为1：2000的血浆凝固酶豚鼠抗血清。以两种抗血清建立双抗体夹心ELISA方法,优化后ELISA实验条件为：豚鼠抗血清作为包被抗体,兔抗血清作为检测抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体作为酶标抗抗体,兔抗血清按1：2000稀释,豚鼠抗血清按1：1000稀释,酶标记的羊抗兔抗体按1：5000稀释。ELISA检测方法的评价结果是：枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、志贺氏菌、沙门氏菌、白色念珠菌、黑曲霉用ELISA法检测,均无显著交叉反应,特异性良好；ELISA检测多个样品组内变异系数在7.4%～12.4%,组间变异系数在8.5%～14.2%,变异程度较小,重复性好；ELISA法用于血浆凝固酶检测灵敏度高于兔血浆凝固法；ELISA法用于金黄色葡萄球菌快速检测灵敏度高于国标法,低于实时荧光定量PCR法。证明建立的血浆凝固酶双抗体夹心ELISA方法在灵敏度、特异性及重复性方面均能满足检验需求。国标法检测金黄色葡萄球菌至少需要72小时,ELISA法检测金黄色葡萄球菌只需12小时,ELISA法检测速度能满足快速筛选的需求。ELISA法检测每个样品的费用不超过现有方法的十分之一,在检验成本方面较有较大的优势。ELISA法能为基层检验机构进行金黄色葡萄球菌快速检验提供良好的技术保障。