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目的:研究亚致死性热温度处理肝癌细胞与正常肝癌细胞的长链非编码RNA表达谱,并进行初步的生物信息学分析。探讨“温度双重效应”现象中46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的相关分子机制。方法:建立人肝癌细胞SMMC-7721亚致死性热温度模型,以模拟肝癌不全RFA过渡区温度微环境。采用最新Agilent Human lncRNA+m RNA Array V4.0芯片检测lncRNA/m RNA差异表达情况。将原始数据进行标准化处理,对差异表达的m RNAs进行GO及KEGG分析,对差异表达的lnc RNA/m RNA构建共表达网络。筛选20条FC(abs)≥2,且p<0.05的lncRNA在SMMC-7721、MHCC97-H和HepG2三株肝癌细胞中进行q RT-PCR验证。选定50℃显著差异表达的ENST00000602478.1(lncRNA RNU12)为本研究的重点。利用Annexin-V/PI荧光染料检测4种温度(37℃、43℃、46℃、50℃)处理条件下,重组人TRAIL蛋白对MHCC97-H细胞凋亡比例的影响。采用慢病毒干扰技术抑制MHCC97-H细胞lncRNA RNU12的表达,q RT-PCR和Western blot检测HSP72的mRNA和蛋白在转染慢病毒干扰载体前后的表达变化。再次利用Annexin-V/PI染色检测转染前后对重组人TRAIL蛋白对MHCC97-H细胞凋亡比例的影响。最后,采用荧光原位杂交技术对lncRNA RNU12进行细胞内荧光定位。结果:博奥晶芯lncRNA+mRNA microarray芯片一共包含41,000条lncRNAs和34,000条m RNAs。满足FC(abs)≥2且p<0.05条件,上调的lncRNA有1475条,m RNA有1015条;同理,下调的lncRNA有775条,mRNA有3374条。ENST00000602478.1(lncRNA RNU12)在MHCC97-H、SMMC-7721和HepG2 3株人肝癌细胞亚致死性热处理模型中保持显著稳定上调,ENST00000602478.1(lncRNA RNU12)分别上调了37.00倍、24.60倍、84.31倍。差异表达的mRNA中,2314条参与生物学进程(Biological process)、2252条参与分子功能(Molecular function)、2443条参与细胞组件(Cellular component)。Pathway分析显示,20条基因通路受差异表达的m RNA调控,富集程度最高的是氧化磷酸化(Oxidative phosphorylation),共有44个目的基因参与组成。43℃促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡,46℃~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡。转染慢病毒干扰载体后HSP72 m RNA表达水平在4个组中均明显降低(P<0.01);同理,HSP72蛋白水平在37℃、46℃、50℃组明显降低,在43℃组虽然差异没有统计学意义,但具体数字仍是降低的。沉默lncRNA RNU12可显著提高46℃和50℃条件下TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡率。RNA-FISH技术显示37℃时lncRNA RNU12在MHCC97-H细胞核和细胞质中均有表达,而50℃时在细胞核中表达显著增加。结论:(1)首次利用lncRNA+mRNA microarray芯片揭示亚致死性热处理肝癌细胞中差异表达的lncRNA。(2)lncRNA RNU12受亚致死性热温度刺激后表达显著增加,其可能通过一种或多种途径参与肝癌细胞残癌的发生发展。(3)“温度双重效应”现象在肝癌细胞中同样存在。(4)46~50℃时lncRNA RNU12可在转录水平上调HSP72表达。(5)表达增加的HSP72可抑制重组人TRAIL蛋白诱导的肝癌细胞凋亡。