植物广谱抗病基因克隆及载体构建的研究

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园林植物多进行保护地栽培,高温高湿的局部小气候使园林植物更容易感染多种病害,而一旦染病则会严重影响园林植物的观赏价值,造成经济上的重大损失。一方面,园林植物抗病育种周期长,能够用做抗病育种的园林植物种质资源贫乏,短时间内园林植物抗病育种难以有所大的突破;另一方面,日益蓬勃发展的园林业迫切需要能够抵抗多种病害的广谱抗病商品植株。系统获得性抗性(Systematic acquired resistance, SAR)是植物抵御病原菌侵染的最有效手段,我们可以利用SAR信号传导途径中的关键功能基因来启动园林植物自然防御系统,达到广谱抗病的目的。NPR1基因在植物的SAR发生中起着重要的作用,通过NPR1基因的过量表达可以诱导植物SAR的起始,使植物产生对多种病原菌的广谱抗病性。TGA2转录因子能直接和多个病程相关基因启动子结合感应SA的调节元件结合,能够增强病程相关蛋白的表达水平,特异的诱导植物产生SAR,从而启动植物的广谱抗病。本研究主要研究成果如下:1.通过反转录PCR,从拟南芥中克隆出广谱抗病基因NPR1。测序结果显示所克隆NPR1基因全长1782bp,与NCBI所登陆的基因100%同源。2.通过反转录PCR,从拟南芥中克隆出能够诱导广谱抗病的TGA2转录因子。测序结果显示所克隆TGA2基因全长993bp,与NCBI所登陆的基因99.8%同源,发生了两个碱基的置换,但所翻译氨基酸没有变化。3.将NPR1基因正向插入中间载体的CaMV35S启动子和T-nos终止子之间,构建出p35ST-NPR1植物表达载体。4.将TGA2转录因子正向插入中间载体的CaMV35S启动子和T-nos终止子之间,构建出p35ST-TGA2植物表达载体。5.将NPR1基因正向插入到pMXB10蛋白表达载体中,构建出pMXB10-NPR1蛋白表达载体。6.将TGA2转录因子正向插入到pMXB10蛋白表达载体中,构建出pMXB10-TGA2蛋白表达载体。
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