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金枪鱼是名贵海洋鱼类，因其营养丰富味道鲜美，一直被公认为最理想的健康食品。鱼头是金枪鱼产业化加工下脚料的主要组成部分，其蛋白质含量高，氨基酸组成合理，是制备开发生物活性肽的理想原料。本实验室长期开展金枪鱼头高值化利用的研究，已有实验结果证明，黄鳍金枪鱼头蛋白酶解液10-5KDa组分具有增强小鼠免疫功能的作用。本研究在此基础上对金枪鱼头蛋白酶解物10-5KDa组分进行了营养学评价和理化性质分析，采用葡聚糖凝胶层析法对免疫活性肽进行了分级分离，研究了活性组分对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。旨在寻求免疫活性肽的分级分离条件，为探讨其增强免疫作用机理以及开发利用提供理论基础。主要研究结果如下：利用超滤法从金枪鱼头蛋白酶解液中制备10-5KDa组分TIP，对TIP的营养学和理化性质进行了较系统的分析。TIP的粗蛋白含量高达86.1%，脂肪含量0.86%，含有人体必需的矿物质元素钾、钠、镁、钙、磷和微量元素铁、锌、铜、硒。氨基酸组成合理,总氨基酸含量为5.15g/100mL,其中必需氨基酸占36.28%，鲜味氨基酸占48.12%。分子量分布结果显示TIP中存在多种分子量的片段，其中10～5KDa的组分占27.49%，3.6～1.4KDa之间的占40.93%，1KDa以下有18.20%。采用氮溶指数（NSI）对TIP的溶解性进行评价，结果显示TIP有着优良的溶解性，在pH2～pH12范围内、30～85℃温度范围内，NSI均达到0.9以上。TIP乳化性一般，起泡性良好，在蛋白浓度为3%时，发泡性达到最高值为1.60，发泡稳定性偏低，但在pH10时，显著增强。采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25对TIP进行了初步分离，确定了最佳分离条件:柱规格2.6×60cm流速0.5mL/min,上样量为20mg/mL×5mL，此条件下TIP可以分为TIP1，TIP2，TIP3，TIP4和TIP5五个部分。通过小鼠体外脾淋巴细胞增殖实验对分离组分进行免疫活性跟踪，证实组分TIP3的中剂量（0.2mg/mL）、低剂量（0.01mg/mL）组可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖(P<0.05)，有较好的活性。对TIP3采用SephadexG-15做进一步分离纯化，得到三个洗脱峰，对主要组分TIP3B,TIP3C进行氨基酸分析和电喷雾质谱分析，结果显示TIP3B肽含量约占86%,主要由200-1200Da的肽段组成。TIP3C组成成分复杂，肽含量约占74%，主要由分子量200-800Da的小肽构成。经脾淋巴细胞增殖活性测定显示，TIP3C在浓度为0.05mg/mL时，可以显著促进小鼠体外脾淋巴细胞的增值(P<0.05)。考察了组分TIP3C对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。用MTT比色法和吞噬中性红法考察了TIP3C对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活性和吞噬功能的影响；采用Griess法和ELISA法检测了TIP3C对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮（NO），诱导细胞因子TNF-α、IL-6产生的影响。结果显示TIP3C高（0.04mg/mL）、中（0.02mg/mL）、低（0.01mg/mL）剂量组均对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力有增强作用(P<0.05)，其活性与阳性对照0.02mg/mL脂多糖相当；低剂量组可以明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.05)，且活性显著大于阳性对照0.02mg/mL脂多糖(P<0.05)。TIP3C刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放NO、TNF-α、IL-6的量高于阴性对照组，但均无显著性差异（P>0.05）