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研究目的构建雷帕霉素、环孢霉素A控释系统和兔高危角膜移植排斥反应模型；探讨雷帕霉素控释系统的眼内释药性和生物相容性；比较不同药物控释系统治疗兔高危角膜移植排斥反应的效果并探讨其机制。研究方法1、将RAPA或CsA粉剂与不同比例的聚乳酸／聚乙二醇(PLA/PEG)混合,制成药物缓释膜；不同条件下将RAPA粉剂与聚乳酸/胆固醇改性壳聚糖(PLA/Cs-Chol)混合,制成不同粒径的RAPA纳米缓释粒,探讨不同药物控释系统的体外药物释放效率,SPECT观察RAPA纳米粒在眼表的滞留时间。2、新西兰白兔36只(36眼),随机分为4组,观察4周。观察RAPA及其控释系统的眼内生物相容性；前房内RAPA控释系统药物浓度变化。3、采用健康新西兰大白兔建立105只(105眼)角膜新生血管模型,施行穿透性角膜移植术并随机分为B、C、D、E、F、G、H7组,每组15只,健康灰兔为供体；另取15只健康眼新西兰大白兔为A组,以同种兔眼为供体。A组同源对照组；B组未治疗组；C组前房植入空白缓释膜,并空白纳米粒滴眼液点眼,每天2次共28天；D组术后每天1%RAPA滴眼液点眼3次共28天；E组术后每天0.5%RAPA纳米粒滴眼液点眼2饮共28天；F组术中前房植入RAPA缓释膜；G组术中前房植入CsA缓释膜；H组术中前房植入CsA缓释膜,术后每天0.5%RAPA纳米粒滴眼液点眼2次共28天。术后隔天用裂隙灯显微镜观察角膜植片存活时间,免疫组织化学、RT-PCR、ELISA评价药物控释系统治疗兔高危角膜移植排斥反应效果。研究结果1、以溶剂挥发法制备RAPA纳米粒,获得之微粒呈规则圆形,表面光滑,粒径分布窄。以Cs-Chol为乳化剂,变化其他条件,可制备各种不同特性的载药微粒。随乳化剂Cs-Chol浓度增大,微粒载药率、包封率和产率也增大,但载药微粒粒径是减小的；随RAPA浓度增大,微粒载药率和产率也增大,而包封率变化不大；不同比例(体积比)丙酮和二氯甲烷溶剂作油相时,随二氯甲烷比例增大,微粒粒径也增大；随PLA相对分子质量增大,微粒产率略有下降,但微粒粒径增大。纳米粒能明显延长药物眼表滞留时间；RAPA含量高、粒径小的载药纳米粒突释显著,药物释放速度快。2、PEG载药缓释膜药物释放速度大于无PEG载药缓释膜；随PEG含量增加,载药缓释膜药物释放速率加快。3.RAPA控释系统与兔眼生物相容性良好,裂隙灯检查、眼压、角膜内皮细胞数、组织病理学、角膜内皮扫描电镜、晶状体前囊膜扫描电镜、视网膜透射电镜各组间结果无显著差异。4.0.5%RAPA(?)内米粒滴眼液和前房植入RAPA缓释膜均能向眼部持续给药；0.5%RAPA纳米粒滴眼液能提供稳定的房水药物浓度。5.0.5%RAPA纳米粒滴眼液组(E组)、RAPA缓释膜前房植入组(F组)和CsA缓释膜前房植入组(G组)角膜植片存活时间无明显差异(P>0.05),较B、C、D组延长(P<0.05)；联合用药组(H组)角膜植片存活时间较E、F、G组明显延长(P<0.01)；同源对照组(A组)角膜植片未发生排斥反应,角膜植片存活时间较H组长(P<0.01)。结论1、不同RAPA否量：不同粒径及不同制备条件等因素影响RAPA载药粒释药性能,载药量40.2%、粒径300nm RAPA纳米粒体外释放效果良好。2.50:1(W/W)PEG/PLA共混RAPA.CsA缓释膜体外释放效果良好。3.RAPA控释系统与兔眼生物相容性良好；0.5％RAPA纳米粒滴眼液组房水药物浓度更稳定。4.0.5%RAPA纳米粒滴眼液、RAPA缓释膜和CsA缓释膜前房植入能延长兔高危角膜移植术后植片存活时间。5、局部联合用药疗效优于单独用药,但未达到同源对照组效果。