【摘 要】
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目的:食管胃结合部腺癌（adenocarcinoma of the esophagogastric junction,AEG）因其独特的生物学和病理学特点,目前仍是一种有争议的恶性肿瘤,且没有统一的界定和合适的治疗方案。SMC4（Structural maintenance of chromosomes protein 4）则介导染色体装配和姐妹染色单体分离过程,从而在细胞周期进程中发挥作用。本项
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目的:食管胃结合部腺癌（adenocarcinoma of the esophagogastric junction,AEG）因其独特的生物学和病理学特点,目前仍是一种有争议的恶性肿瘤,且没有统一的界定和合适的治疗方案。SMC4（Structural maintenance of chromosomes protein 4）则介导染色体装配和姐妹染色单体分离过程,从而在细胞周期进程中发挥作用。本项目旨在通过一系列实验探讨并验证SMC4与AEG调控关系及内在机制。方法:1.将收集的20例食管胃结合部腺癌及癌旁正常组织进行蛋白质谱测定,获得差异表达基因SMC4。2.通过蛋白质印迹法（Western Blot）获取SMC4在胃上皮细胞及AEG细胞中的表达情况。3.对SMC4表达量升高的细胞BGC-823、SGC-7901进行慢病毒感染,构建阴性对照及SMC4敲除细胞模型。4.对构建的细胞模型分别进行Western Blot及实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（q RT-PCR）以确定干扰序列对细胞内SMC4的干扰是否成功。5.对建立的细胞模型进行克隆形成实验、CCK-8实验以探究SMC4在增殖过程中的作用。6.Transwell试验和划痕实验用于分析SMC4在迁移、侵袭过程中的作用。7.流式细胞术PI单染和FITC/PI双染分别用于研究敲除SMC4后,细胞周期和细胞凋亡的改变情况。8.通过Western Blot实验研究SMC4与细胞凋亡和细胞周期间的联系。9.利用Western Blot探讨SMC4同上皮间质转化（EMT）间的关联。10.Western Blot方法研究了SMC4同PI3K/AKT通路间的关联。结果:1.蛋白质谱的结果揭示了在AEG组织中SMC4的表达水平有所上升。2.相比于胃上皮细胞,SMC4在AEG细胞中表达量增多。3.SMC4敲除组细胞的SMC4表达量较之阴性对照组显著降低,说明已成功构建SMC4敲除细胞模型。4.相关实验成果揭示了,SMC4干扰组细胞的增殖能力相较于阴性对照组有所减低。5.沉默SMC4的表达后,细胞的侵袭和迁移性有所减弱。6.相较于对照组,SMC4敲除组细胞凋亡的发生有所增多、而周期进展受到阻碍,被阻滞在G0/G1期。7.敲除SMC4使cleaved-caspase 3、Bax（促凋亡蛋白）的蛋白水平得以提升,而Bcl-2（抗凋亡蛋白）的表达量得以减少;干扰SMC4的表达会导致CDK4、CDK6和Cyclin D1（周期相关蛋白）减少。8.相较于对照组,下调SMC4致使EMT相关蛋白N-cadherin和Vimentin的蛋白含量减少,而使E-cadherin水平得以提升。9.干扰SMC4的表达减少了细胞内磷酸化PI3K、磷酸化AKT及磷酸化m TOR的蛋白水平。结论:下调SMC4可通过抑制PI3K/AKT通路的激活使AEG细胞增殖、迁移、侵袭能力受抑,促使细胞凋亡和细胞周期G0/G1期阻滞的发生,致使EMT转化受到阻遏。因此,SMC4可能成为AEG的潜在治疗靶点。
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