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人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV—1）和梅毒螺旋体（Treponema pallidum,TP）是两种重要的性传播疾病病原体,可通过性接触、输血和母婴传播。艾滋和梅毒发病率极高,对人类健康危害极大,导致的疾病很难治愈,因此及早有效诊断是防治和减缓性传播疾病的重要措施。 生物芯片的制备成本高,检测系统昂贵,这些因素限制了生物芯片的实际应用。近年来,美国西北大学Mirkin等发展了一种用纳米金粒子标记核酸的比色分析方法,以胶体金为标记物的免疫金和免疫金银染色法相结合可以使检测信号放大100万倍。该方法具有超过荧光检测100倍的敏感性,快速简便,不需特殊的仪器设备,结果直接肉眼可见。本文将此纳米金标记技术应用在生物芯片技术上,旨在建立目视化生物芯片技术方法对艾滋和梅毒进行快速、准确、价廉、操作简单的诊断研究,分别探讨了艾滋和梅毒目视化同步检测基因芯片的研制和梅毒Tpp47目视化蛋白芯片的研制方法。主要内容包括: 一.艾滋和梅毒目视化同步检测基因芯片的研制 利用GeneBank及相关文献选择HIV gag基因和梅毒螺旋体Tpp47基因片段作为靶基因,并针对靶基因设计特异性探针。在对艾滋和梅毒进行同步扩增条件的摸索过程中,选择引物对浓度、dNTPs浓度、Mg++浓度及TaqDNA聚合酶浓度为四个参变量,得到了较好的艾滋和梅毒同步扩增结果。将HIV-1和TP各自高度保守的经氨基修饰过的探针固定在醛基化玻璃基片上,含生物素的待检靶基因片段与HIV—1以及TP特异探针杂交后的结果通过链酶亲和素标记的金探针识别其上的生物素,并经金银加强显色放大而达到目视化效果,建立了艾滋和梅毒目视化同步检测基因芯片的制备方法。在此基础上应用临床样品进行检测,考察其特异性以及探针溶剂、杂交时间和银染时间对检测结果的影响,以进一步优化基因芯片的制备与检测条件。 二.梅毒Tpp47目视化蛋白芯片的研制 在本实验室多年对玻片表面处理的研究基础之上,自行改进制备醛基化玻璃