利用DDRT-PCR技术筛选新疆超细型细毛羊毛用性状相关基因

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羊毛的生产具有重要的经济价值。羊毛纤维直径是评定羊毛品质的重要性状,在同一品种,同一年龄,相同的环境和饲养管理条件下,个体的遗传差异对羊毛的生长起到了决定性的作用。新疆是我国重要的生产羊毛的地区,新吉细毛羊是我国生产优质羊毛的主要品种。本实验测定了184只2岁新疆超细型细毛羊(新吉细毛羊)的羊毛纤维直径,选取其中纤维直径极粗和极细的细毛羊各6只,取其皮肤组织组成RNA池作为实验研究对象,应用mRNA差异显示技术筛选不同纤维直径的绵羊肩部皮肤的差异表达基因,以期为细毛羊早期选种提供理论和技术上的参考。实验过程中,选用3种锚定引物,8种随机引物,经过24对引物组合进行差异显示反转录PCR,扩增产物经过聚丙烯凝胶电泳分析、回收差异表达的基因片段,共筛选出53条差异表达片段,进行二次扩增,利用pGM-T载体将扩增后的片段克隆,经过反Northern Blot分析后,筛除假阳性片段,将13条阳性差异片段测序。在13条测序的片段中,有3条片段未找到引物序列,2条片段与切胶时片段大小不一致。将其余8条片段的测序结果在GenBank里分析,其中6条为新序列,2条较高相似性功能基因,其中一条与LaminB基因(LMNB)同源,另一条与SHROOM2基因和GPR143基因同源。本实验同时用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定BⅢB4基因在细毛羊皮肤中的mRNA表达水平,以18SrRNA为内标,分析相对表达量及其与羊毛纤维直径的关系。用Independent Samples T Test分析BⅢB4 PCR产物与18SrRNA PCR产物电泳后的灰度比值,可知BⅢB4基因mRNA表达量对羊毛纤维直径的影响不显著。
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