稀土镧抑制宫颈癌效应及机制的体内研究

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目的:研究氯化镧对小鼠宫颈癌皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨氯化镧诱导宫颈癌细胞凋亡及其可能机制,并为氯化镧应用于宫颈癌的治疗提供实验基础。方法:采用小鼠宫颈癌U14细胞株,以PRMI1640培养液配制细胞浓度为5×106/ml,取0.2 ml细胞悬液接种于小鼠右侧腋窝皮下建立皮下移植瘤模型。将模型鼠随机分组:氯化镧(LaCl3)组、顺铂(DDP)组和生理盐水(NS)对照组,每组30只;连续给药7天,每天观察小鼠生活习性并测量小鼠的体重,观察小鼠生存期;同时每组随机取15只小鼠于停药次日颈椎脱臼法处死,取出肿瘤组织并称重,计算抑瘤率;采用原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞凋亡情况并计算凋亡指数;用免疫组织化学技术测定肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况;以RT-PCR方法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax基因表达变化;每组另外15只荷瘤小鼠继续饲养观察生存期。结果:1.氯化镧组与对照组荷瘤小鼠精神、饮食、排便情况无明显差别,顺铂组荷瘤小鼠精神稍差,出现厌食、腹泻及体重明显减轻等情况。2.氯化镧对小鼠宫颈癌移植瘤的生长有抑制作用:氯化镧0.5mg/kg、2mg/kg、8mg/kg剂量组瘤重分别为(0.9±0.17)g、(0.73±0.12)g和(0.56±0.11)g,均显著低于对照组(1.42±0.30)g,差异有统计学意义(P<0.05);抑瘤率分别为(36.85±9.20)%、(48.59±9.51)%和(60.16±9.42)%;顺铂组瘤重为(0.32±0.1)g,抑瘤率为77.46±10.12%。3.氯化镧能显著延长荷瘤小鼠的生存期,氯化镧0.5mg/kg、2mg/kg、8mg/kg剂量组中位生存期为60、68、46天,对照组55天,顺铂组46天。4. TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,对照组肿瘤细胞凋亡指数为5.38±1.45%,氯化镧(2mg/kg,下同)组凋亡指数为(12.53±3.05)%,凋亡细胞数明显增多,顺铂组凋亡指数为(13.62±2.97)%,氯化镧2mg/kg组和顺铂组与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。5.运用免疫组织化学技术检测肿瘤组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况,Bax(IOD):氯化镧2mg/kg组和顺铂组分别为53826.54±5534.8、71453.65±4964.7,与对照组33860.32±4964.78相比表达均明显增高有统计学意义(P<0.05); Caspase-3 (IOD)氯化镧2mg/kg组和顺铂组分别为18218.69±2462.2、12128.67±912.91,与对照组4729.93±1188.45相比表达均显著增高有统计学意义(P<0.05);Bcl-2(IOD):氯化镧2mg/kg组和顺铂组分别为21961.61±1154.22、14613.66±1043.82,与对照组48873.96±3508.15相比表达均明显降低有统计学意义(P<0.05)。6.用RT-PCR方法检测肿瘤组织国Bcl-2和Bax基因表达情况;氯化镧2mg/kg组和顺铂组Bax表达量显著高于对照组,而Bcl-2表达量显著低于对照组。Bax与内参β-actin光密度比值:氯化镧2mg/kg组为0.70±±0.12、顺铂组为0.70±±0.13,两者与对照组0.47±±0.04相比均有统计学意义(P<0.05);Bcl-2与内参β-actin光密度比值:氯化镧2mg/kg组0.64±0.07、顺铂组0.55±±0.04,两者与对照组0.89±±0.08相比也均有统计学意义(P<0.05)结论:1.氯化镧明显抑制小鼠宫颈癌皮下移植瘤的生长。2.与顺铂组相比氯化镧可提高荷瘤小鼠生存质量。3.氯化镧能延长荷瘤小鼠的生存期。4.氯化镧能诱导宫颈癌细胞凋亡。5.氯化镧通过下调Bcl-2和上调Bax、Caspase-3表达,达到诱导宫颈癌细胞凋亡的作用从而抑制其生长。
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