骨肉瘤是发病率最高的骨恶性肿瘤,具有易复发及肺转移率高的特点。上个世纪八十年代后,通过手术联合化疗的方案,显著提高了疗效,使五年以上的预期寿命达到了接近70%,但是近三十年来却一直没有进一步改善。特别是复发的或者存在肺转移的骨肉瘤,目前的治疗手段疗效极差。另外,高剂量的化疗药如甲氨蝶呤和阿霉素等,存在很大的副作用。因此,急需新型安全高效的治疗手段治疗骨肉瘤。免疫治疗是治疗骨肉瘤的综合治疗手段之一,被认为是继手术和化疗之后的第三类治疗手段。近年来,关于过继T细胞抗肿瘤的研究得到了越来越大的重视。其中,作为肿瘤免疫治疗的重要组成部分,γδ T细胞抗肿瘤的作用已成为热点。本课题组已证实γδ T细胞对骨肉瘤细胞能产生细胞毒性,但是γδ T细胞对肿瘤细胞识别能力不足,以及肿瘤微环境中存在的如Treg细胞具有免疫抑制作用,限制了 γδ T细胞免疫治疗的临床应用。随着模式识别受体概念的提出,具有较强免疫调节功能的Toll样受体(toll-likereceptor,TLR)是近些年来免疫学的重大进展。本课题探究TLR激动剂对γδ T细胞杀伤骨肉瘤的促进作用及其机制,为骨肉瘤患者过继免疫治疗提供科学依据。本次研究分为两部分。一、获取健康志愿者的外周血单核细胞,通过ZOL和IL-2联合刺激以扩增获得高纯度的γδ T细胞。二、在第一部分的基础上,探索TLR3激动剂促进γδ T细胞杀伤骨肉瘤细胞的能力和机制。结果发现TLR3激动剂具与γδ T细胞联合具有协同增强抗骨肉瘤细胞的能力。进一步研究显示TLR3激动剂预处理骨肉瘤细胞后,会引起骨肉瘤细胞表面CD54的表达升高,引起γδ T细胞CD107a表达水平提高,并刺激γδ T细胞分泌炎症因子,从而产生协同促进γδ T细胞抗骨肉瘤的作用。