作为参与凝血的人体血浆中的重要蛋白质，纤维蛋白原（Fibrinogen, Fg）易被体内产生的细胞毒性物质过氧亚硝酸根（ONOO-, PN）硝化损伤，进而改变蛋白质的结构和功能。过氧亚硝酸根对纤维蛋白原的硝化损伤使其凝血功能失常，引发相关疾病。正常情况下，人纤维蛋白原的硝化水平比较低，但在某些病理条件下，如动脉硬化症，心肌梗死，冠心病突发等，纤维蛋白原的硝化水平迅速上升。因此，它的硝化机制的研究和活性分析对预防和控制心脑血管疾病异常重要。本论文以纤维蛋白原为对象，应用紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计、高效液相色谱、液质联用仪、红外光谱仪等分析仪器，模拟体内微环境，探讨了过氧亚硝酸根对纤维蛋白原结构损伤及由此引发的生物活性的改变，初步阐明了硝化损伤和化学修饰相关的作用机理，为药物研究提供了一定的理论基础。此外，不同的氨基酸和基团各有其特定的化学修饰剂，研究这些基团与活性之间的关系，旨在揭示化学修饰对蛋白功能和硝化的影响。我们采用衰减全反射傅里叶变换红外光谱（ATR-FTIR）对硝化蛋白的二级结构进行定性和定量分析。结果显示α-螺旋和β-片层的酰胺I带红外光谱出现了明显的位移，且α-螺旋减少了大约8%，而β-片层结构含量增加了13.6%。α-螺旋向β-片层结构转变，这对前人的实验结果是一个有力的补充及验证。SDS-PAGE分析发现纤维蛋白原γ链（FgⅠ）最易受到ONOO-的攻击。而三维荧光法检测表明它的两个荧光特征吸收峰随着PN浓度的增加也发生猝灭。在此基础上，我们采用高效液相色谱—电喷雾离子阱串联二级质谱和多肽序列测定等分析手段鉴定了FgⅠ的优先硝化位点。我们用胰蛋白酶（Trypsin），葡萄球菌蛋白酶（Glu-C）和糜蛋白酶（Chymotrypsin）对纤维蛋白原进行酶切，保证了酪氨酸100%的覆盖率及高肽段覆盖率，在对基峰，一级，二级质谱图进行分子质量的比对及大量数据分析的基础上鉴定出Trypsin酶切肽段的优先硝化位点是Y96，Y262，Y274和Y363，其中Y262是Glu-C和Trypsin共有的敏感位点，而且随着PN浓度的增加，各位点的硝化程度亦显著加强。我们还对纤维蛋白原的酪氨酸、蛋氨酸和羧基进行化学修饰后检测其对凝聚活性和硝化作用的影响。研究发现酪氨酸和蛋氨酸与活性有密切的关系，NAI促进了纤维蛋白原的凝血活性，而Ch-T却表现为抑制作用。Ch-T和NAI等修饰剂在0.4-0.5mg/mL以下时促进了ONOO-对蛋白的硝化损伤。EDC修饰羧基的酸性环境使蛋白发生变性，凝聚活性和硝化作用均受到不同程度的抑制。