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研究背景与目的:脑血管病是老年人群中的高发疾病,其致残率高、死亡率高的特点严重影响患者的临床救治和预后,并发症多是其危害严重的重要影响因素。除脑血管病本身引发的大脑实质病变和相关神经功能缺损外,脑缺血后消化、循环、内分泌及免疫等其他系统功能改变对脑血管病患者临床诊治和预后的影响近年来也备受关注。卒中后患者和大多数神经退行性疾病患者在发病早期就已出现肠道微生物群紊乱、肠黏膜受损、肠道神经源性反应和肠道炎症反应等症状。而肠道生态失衡及肠功能紊乱被证实与痴呆等认知功能障碍疾病的发生发展密切相关,肠黏膜屏障及肠道功能改变在认知行为等神经功能调节、炎性反应调控、机体功能维持中有重要意义。慢性脑低灌注（chronic cerebral hypoperfusion,CCH）作为缺血性脑血管病的重要病理生理基础,也是引发阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease,AD）等神经退行性疾病与血管性认知障碍（vascular cognitive impairment,VCI）等卒中后神经血管功能障碍的重要危险因素和病理生理机制。然而,目前CCH对肠道等外周远端器官的影响尚未明确,而进一步探讨CCH所致肠黏膜屏障结构及功能改变,对于深入认识脑缺血相关神经退行性疾病和神经血管功能障碍的相关病理生理机制、探讨有效防护措施可能有重要意义。因此,本研究在前期研究的基础上,通过观察CCH大鼠肠黏膜上皮形态和肠屏障通透性的动态变化特点及规律,并探讨肠道紧密连接蛋白claudin-3表达水平与肠屏障通透性的相关机制,从而揭示CCH对大鼠肠黏膜屏障形态结构及功能的影响。材料与方法:将80只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机（随机数字表法）分为假手术对照组（Sham组,n=8×4）、CCH模型组（CCH组,n=12×4）,各组大鼠再次随机分为4个亚组,即分别为1周、4周、12周和24周组。采用永久性双侧颈总动脉结扎（bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO）法建立CCH大鼠模型。通过HE染色观察肠黏膜上皮形态学变化规律;检测血浆D-乳酸含量反映肠屏障通透性动态变化规律;免疫荧光染色和Western blot实验分别原位标记和量化分析claudin-3的表达及其变化规律;分析血浆D-乳酸含量与肠组织claudin-3表达水平的相关性。结果:1.CCH致大鼠回肠黏膜上皮形态持续性损伤:HE染色结果显示,Sham组回肠黏膜结构较为完整,绒毛形态呈指状,排列整齐。CCH组损伤明显,回肠绒毛明显变粗、变钝,绒毛顶端部分脱落,黏膜与黏膜下层分离,可见固有层及其血管暴露。Chiu氏肠黏膜损伤评分系统评估结果表明,CCH组大鼠回肠黏膜1周至24周与Sham组比较明显分值更高（1周、4周、12周和24周Sham组vs.CCH组分别为:0.88±0.64 vs.2.62±0.52,P<0.001;1.12±0.64 vs.3.88±0.52,P<0.001;1.25±0.64 vs.3.75±0.71,P<0.001;1.50±0.53 vs.3.62±0.52,P<0.001）,各亚组间差异均具有统计学意义。CCH组不同时间点比较差异显著(F（3,28）=6.038,P=0.003),4周组较1周组分值差异显著（P=0.001）,4周、12周、24周组间差异无统计学意义（12周组vs.4周组P=0.707;24周组vs.12周组P=0.707）。2.CCH致大鼠血浆D-乳酸含量（ng/μl）持续、进行性升高:CCH组大鼠在建模后1周至24周血浆D-乳酸含量与Sham组比较显著升高（1周、4周、12周和24周Sham组vs.CCH组分别为:5.60±1.32 vs.10.25±1.25,P<0.001;6.04±1.39 vs.12.47±1.35,P<0.001;6.42±1.10 vs.12.27±0.95,P<0.001;4.96±0.40 vs.16.10±0.52,P<0.001）,各亚组间差异具有统计学意义。CCH组不同时间点比较差异显著(F（3,16）=22.214,P<0.001),12周组与4周组间差异无统计学意义（P=0.78）,但模型构建后1周至24周血浆D-乳酸含量整体呈持续性增高的特点（4周组vs.1周组P=0.008,24周组vs.12周组P<0.001）。3.CCH致大鼠回肠黏膜上皮细胞间claudin-3丢失:免疫荧光结果显示,模型建立后1周至24周CCH组大鼠回肠黏膜上皮细胞间claudin-3平均荧光密度较Sham组明显降低（1周、4周、12周和24周Sham组vs.CCH组分别为:0.058±0.0061 vs.0.035±0.0018,P<0.001;0.054±0.0077 vs.0.038±0.0027,P<0.001;0.053±0.0049 vs.0.040±0.0019,P=0.001;0.055±0.0056 vs.0.047±0.0035,P=0.004）,各亚组间差异存在统计学意义。CCH组不同时间点比较差异显著(F（3,28）=30.627,P<0.001),组间比较结果显示1周至24周claudin-3荧光密度呈持续性升高趋势（4周组vs.1周组P=0.014;12周组vs.4周组P=0.079,无统计学差异;24周组vs.12周组P<0.001）。4.CCH致回肠组织claudin-3表达水平下调:Western blot实验结果显示,模型建立后1周至24周CCH组大鼠回肠组织claudin-3蛋白表达总量较Sham组明显下调（1周、4周、12周和24周Sham组vs.CCH组分别为:1.02±0.059 vs.0.53±0.073,P<0.001;1.02±0.072 vs.0.56±0.11,P<0.001;1.04±0.10 vs.0.35±0.077,P<0.001;1.08±0.094 vs.0.22±0.054,P<0.001）,各亚组间差异存在统计学意义。CCH组不同时间点比较差异显著(F（3,20）=22.552,P<0.001),组间比较结果显示1周至24周回肠组织claudin-3表达总量呈持续性减少趋势（4周组vs.1周组P=0.455,无统计学差异;12周组vs.4周组P=0.001;24周组vs.12周组P<0.001）。5.回肠组织claudin-3蛋白表达水平与血浆D-乳酸含量Pearson相关性分析结果显示,CCH状态下两者呈高度负相关（r=-0.909,P<0.001）。结论:CCH可致大鼠长期持续性肠黏膜屏障损伤、肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白claudin-3表达下调及肠屏障通透性增加。CCH大鼠回肠组织claudin-3表达水平与肠屏障通透性之间存在高度负相关,提示血浆D-乳酸含量升高、claudin-3表达水平下调或可成为CCH致肠屏障通透性增加及肠黏膜结构受损的预警指标和重要病理标志。这可能为CCH相关神经退行性病变、血管性认知障碍等疾病的治疗及预后提供了新靶点与新方向。