【摘 要】
:
猪附红细胞体病是附红细胞体附在猪红细胞表面、血浆及骨髓中引起的一种人畜共患病,其主要症状为发热、贫血以及黄疸。猪附红细胞体病往往不会单独发病,一般与其他猪病如猪繁殖与呼吸综合症、猪瘟等混合感染,危害严重,但是在防治上较为困难,给我国养猪业造成了较大的经济损失。目前在兽医临床中主要以镜检法作为猪附红细胞体病的诊断方式,包括鲜血直接压片法和血涂片染色法,但是这两种方法均不能准确识别病原体,使得镜检容易
论文部分内容阅读
猪附红细胞体病是附红细胞体附在猪红细胞表面、血浆及骨髓中引起的一种人畜共患病,其主要症状为发热、贫血以及黄疸。猪附红细胞体病往往不会单独发病,一般与其他猪病如猪繁殖与呼吸综合症、猪瘟等混合感染,危害严重,但是在防治上较为困难,给我国养猪业造成了较大的经济损失。目前在兽医临床中主要以镜检法作为猪附红细胞体病的诊断方式,包括鲜血直接压片法和血涂片染色法,但是这两种方法均不能准确识别病原体,使得镜检容易出现误差。因此急需建立一种准确高效且特异性强的检测方法用于临床生产。本实验主要包括三个实验部分:1、阳性标准质粒的构建。2、猪附红细胞体病荧光定量PCR检测方法的建立。3、猪附红细胞体病荧光定量PCR检测方法的临床应用。根据GenBank上已经发表的猪附红细胞体粘附基因MSG1,在其保守区域内设计一对特异性引物,进行DNA体外扩增,胶回收后测序,测序结果为193bp左右与预期结果一致,与GenBank上已经发表的附红细胞体MSG1同源性一致。将提取的DNA用于质粒构建,构建的质粒用于下一实验的敏感性和标准曲线制作。利用构建的阳性质粒成功建立了猪附红细胞体荧光定量PCR检测方法,结果显示,目的基因扩增曲线呈S型,且每一浓度梯度之间相差的Ct值较均匀;熔解曲线正常,存在单一的熔解峰,且无引物二聚体产生,Tm值为83.5℃;标准曲线的线性方程为Y=﹣2.6342X+39.855,标准曲线的斜率为﹣2.6342,截距为39.855,反应的相关系数R~2为0.9977;特异性良好,与健康猪血DNA、猪繁殖与呼吸综合症病毒、衣原体、弓形虫、猪圆环病毒Ⅱ型之间没有交叉反应。组内重复性实验的变异系数在0.84%~2.98%之间,小于5%;组间重复性试验变异系数在0.65%~4.08%之间,小于5%,说明建立的方法有良好的重复性;检测阳性质粒标准品的最低浓度为8.27×10~1拷贝/μL,比普通PCR检测方法敏感性高1000倍,说明该方法敏感性较好。以上结果说明所建立的猪附红细胞体荧光定量PCR检测方法有良好的反应性。对同样30份血样的检测,荧光定量PCR检测阳性率为63.3%,普通PCR检测阳性率为50%,荧光定量PCR阳性检出率比普通PCR高13.3%。对来自岳阳、衡阳、耒阳、攸县四个县市的204份血样进行检测,结果显示,这四个县市均有猪附红细胞体感染:不同种群感染情况为母猪>公猪>仔猪。结论:本研究成功建立了猪附红细胞体病荧光定量PCR检测方法,该方法具有高效、准确、特异性好、操作简单等优点,检测结果更客观、直接,能够更准确的判定阴性、阳性以及可疑样本。通过对血液样本的检测发现猪附红细胞体病感染情况普遍存在。
其他文献
目的:探讨黄疸对己糖激酶(Hexokinase,HK)法测定血糖(GLU)的影响.方法:收集制备不同黄疸程度和含GLU浓度高低不一的黄疸血清90份,其中GLU含量最低为1.0 mmol/L,最高27.5 mmol
数控机床是精密和超精密加工制造的基石,承担着为航空航天、船舶、核电等领域提供高端装备的重任。随着“中国制造2025”计划的提出和落实,制造业对数控机床的加工精度的要求
20世纪的音乐经历着剧烈变化,各种风格与流派接踵而至,形成多元化的发展趋势。表现主义音乐作为其中的一个流派,其产生除了有深刻的社会原因和音乐本体变化之外,还深受19世纪末以来非理性主义哲学思潮的影响。从19世纪中叶以来欧洲知识界普遍滋生出对现实不满和反叛的情绪,在个体精神自由的追求上也走向极端。由多种哲学流派共同汇聚而成的非理性主义哲学思潮则是对一时期欧洲思想情绪与观念最好的折射,其基本特征是蔑视
目的:通过临床观察,验证赵建军教授自拟疏肝泻火方在抑郁状态临床预防和治疗上的有效性,丰富中医药治疗抑郁状态的理论和经验,增添更为有效的新思路以及新方法。方法:将符合研究标准的72例抑郁状态(气郁化火证)患者,通过随机数字表分成治疗组与对照组。治疗组采用赵建军教授自拟疏肝泻火方汤剂治疗,对照组采用舒肝解郁胶囊治疗,每组36人,进行8周临床试验研究及停药后4周的随访,分别记录观察两组治疗前后HAMD、
<正>磁性纳米粒子因其易于修饰、具有超顺磁性易于固-液分离等特性而受到广泛关注;配体垂钓基于分子间的亲和作用,在辨识分子间相互作用中显示出得天独厚的优势。基于磁性纳
当前中国居民杠杆率虽然低于发达国家,但高于发展中国家,而且增速过快,大量杠杆资金积聚在房地产行业。通过构建理论模型从微观经济角度分析居民杠杆形成的理论基础,进而选取
目的:基于观察肿瘤骨转移大鼠转移灶周围骨组织TRPA1和TRPM8表达变化以及冷刺激缩足阈值改变,阐释骨癌痛虚寒型冷痛病机。方法:健康4月龄SD雄性大鼠45只,体质量440~470 g,随
国内外研究者在开展移动学习研究时认为将移动学习方式与传统语言学习方式结合具有很大的发展潜力,这种新兴的学习方式可以弥补大学英语词汇学习的不足。因此,调查研究大学生采用移动学习方式进行英语词汇学习的情况以及大学生对这一学习方式的态度和偏好对提高词汇学习效果、更好满足学习者需求具有理论和现实意义。本文基于前人对国内外移动学习研究,采用问卷调查和采访相结合的方法对江西师范大学210名大学生进行研究,以期
从1990年1月1日开始,国际计量委员会宣布在世界范围内启用量子化霍尔电阻基准,直流电阻的量值溯源不再以实物电阻为基准,受量子霍尔电阻复现条件苛刻的影响,由其复现的电阻量值仍然要由实物电阻作为传递标准逐级向下传递。想要保持传递电阻阻值高度稳定,不仅要求电阻优良的制作材料及制造工艺,而且要在运输过程中为电阻提供高度稳定的温度环境。在中国计量研究院和平里院区以及昌平院区进行量子化霍尔电阻基准比对的过程
集全球定位系统(GPS)、惯性导航系统(INS)于一体的组合定位测姿系统(POS,Positingand Orienting System)既弥补了GPS采样率低、信号容易丢失的缺点,也改进了INS的误差随时间