2017年起,山东多地的规模化养鸭场流行一种以脾脏严重坏死为主要病变的新型鸭呼肠孤病毒病,其病原为新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）。NDRV是一种可垂直传播的免疫抑制性病原,感染后造成机体的免疫力下降,易引发混合感染或/和继发感染,日龄越小,雏鸭的发病率及病死率越高,给我国养鸭业造成严重的经济损失。卵黄抗体是一种存在于免疫禽蛋中的特异性多克隆抗体。相较于血清抗体,卵黄抗体的稳定性、耐酸碱性以及对温度的敏感性都更胜一筹。因为其安全、高产、成本低并且特异性较强等优点,卵黄抗体正广泛运用于生产实践中。本研究分析比较两株以脾坏死为主要特征的NDRV,选择强毒株制备新型鸭呼肠孤病毒病油乳剂灭活疫苗,免疫蛋鸡,制成新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体,并开展临床应用试验。主要内容包括:1.新型鸭呼肠孤病毒制苗用毒株的筛选将本实验室前期分离保存的2株引起脾脏特异性坏死的NDRV（NDRV-SDYC和NDRV-LY20）作为候选毒株进行病毒的纯净性检验和细胞半数感染量(TCID50)测定,并分别开展动物回归试验。结果显示,当雏鸭腿部肌肉注射0.5 m L NDRV-SDYC(TCID50=10-7.65/0.1 m L)病毒液后,出现精神沉郁、采食下降,剖检死亡雏鸭可见脾脏肿大、出血,并伴有明显不规则坏死;当雏鸭腿部肌肉注射0.5 m L NDRV-LY20(TCID50=10-6.66/0.1 m L)病毒液后,出现与前者相似的临床症状及剖检变化,不同的是,后者雏鸭脾脏病变程度、坏死率以及雏鸭体重增长抑制更加严重。最终选取NDRV-LY20株作为制苗用毒株。2.新型鸭呼肠孤病毒油乳剂灭活疫苗的制备将选定的NDRV-LY20毒株作为种毒,接种鸡胚肝细胞传代扩增得到病毒原液制备NDRV油乳剂灭活疫苗。使用不同浓度的甲醛溶液在不同温度、不同时间条件下灭活病毒原液。结果表明,最佳灭活条件为:0.2%的甲醛、37℃条件下灭活24 h。灭活液和吐温-80（Tween-80）按96:4混合作为制备疫苗的水相;将10号药用白油与司班-80（Span-80）按94:6混合后加入终浓度为3%硬脂酸铝搅拌均匀,无菌处理后作为制备疫苗的油相;随后将油相与水相按2:1的比例进行乳化,制备新型鸭呼肠孤病毒油乳剂灭活疫苗,并对疫苗进行性状检验。结果显示,该疫苗剂型为油包水型且稳定性良好,未见病原微生物污染。3.新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备使用高、低两个剂量（±0.5 m L）的上述油乳剂灭活疫苗对于开产蛋鸡递进免疫,收集维持免疫后的高免鸡蛋,利用辛酸法制成卵黄抗体;利用间接ELISA与病毒中和试验检测所制备的抗体效价。结果显示高剂量组所制备的卵黄抗体效价明显高于低剂量组,ELISA和病毒中和试验效价分别为:2-9（1:512）和10-3.82（1:6607）。对卵黄抗体进行性状检验和动物安全性试验,结果显示,该抗体液淡黄、透明澄清;1日龄雏鸭腿部肌肉注射1.0 m L,未见局部红肿或全身性不良反应。4.新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的免疫保护性试验雏鸭体内的卵黄抗体水平检测结果显示,注射卵黄抗体后体内抗体水平迅速升高,在第4 d左右达到最大值,此后不断下降;阴性对照组雏鸭体内抗体水平基本无变化且持续为阴性;第17 d左右,0.3、0.5 m L抗体组雏鸭体内抗体水平基本下降为阴性,0.7 m L卵黄抗体组雏鸭在第21d时血清抗体效价检测呈阴性;第21 d时,1.0 m L卵黄抗体组雏鸭体内抗体水平仍稍大于临界值,所以注射1.0 m L卵黄抗体可有效保护雏鸭抵抗新型鸭呼肠孤病毒感染。雏鸭预防保护试验结果显示,1日龄雏鸭腿部肌肉注射1 m L卵黄抗体,试验组雏鸭均未见感染,表明该抗体可以有效抵抗NDRV-LY20对雏鸭的侵害;与健康对照组雏鸭的体重进行比较,结果表明,阳性对照组雏鸭的增重下降高达24.7%,而使用卵黄抗体的试验组,增重下降最小为7.7%,说明该抗体能够明显降低NDRV感染造成的增重影响。被动免疫保护持续期试验结果显示,1日龄雏鸭腿部肌肉注射1 m L卵黄抗体,免疫后5 d人工感染NDRV,脾坏死率与坏死程度最低,表明单次注射的被动免疫保护持续期约为5天。综上所述,本研究制备的NDRV卵黄抗体具有良好的预防保护效果,能够明显抵抗NDRV的感染,为我国防治新型鸭呼肠孤病毒病提供了一种快速有效的特异性生物制品。