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目的:探究Lnc NONRATG001910.2通过ce RNA的机制参与慢性肾小球肾炎的发生发展,同时阐明健脾祛湿化瘀方通过抑制Lnc NONRATG001910.2/miR-339-3p/CTNNB1轴改善CGN。方法:1、Lnc NONRATG001910.2/miR-339-3p/CTNNB1轴介导慢性肾炎发病的分子机制以LPS诱导HBZY-1细胞构建体外模型,采用RT-qPCR技术检测Lnc NONRATG001910.2的表达情况,并采用透射电镜观察细胞的超微结构,CCK8法及流式细胞术检测转染Lnc NONRATG001910.2质粒/si RNA后对细胞功能的影响。同时,为了验证Lnc NONRATG001910.2在LPS刺激的HBZY-1细胞中可能通过ce RNA机制影响细胞功能,采用FISH实验及核质分离实验检测Lnc NONRATG001910.2在细胞中的分布情况,双荧光素酶实验验证Lnc NONRATG001910.2及CTNNB1序列上是否存在miR-339-3p的结合区域,RT-qPCR技术检测不同处理后Lnc NONRATG001910.2、miR-339-3p、CTNNB1的相对RNA表达水平,WB技术检测不同处理后CTNNB1蛋白的表达水平。同时,采用回复实验,对细胞功能进行回复。最后,利用RT-qPCR、WB以及免疫荧光实验检测CTNNB1、c-Myc以及Cyclin D1表达水平。2、健脾祛湿化瘀方调控Lnc NONRATG001910.2/miR-339-3p/CTNNB1轴治疗CGN的机制研究CCK8法筛选健脾祛湿化瘀方干预的条件（含药血清干预浓度及时间）,RTqPCR用于检测不同处理后Lnc NONRATG001910.2、miR-339-3p、CTNNB1、cMyc、Cyclin D1的RNA表达水平,WB及免疫荧光共同测定CTNNB1、c-Myc、Cyclin D1的相对蛋白表达水平,CCK8法以及流式细胞术检测健脾祛湿化瘀方对细胞功能的影响。结果:1、Lnc NONRATG001910.2/miR-339-3p/CTNNB1轴介导慢性肾炎发病的分子机制与Control组相比,Lnc NONRATG001910.2的RNA相对水平在LPS刺激的HBZY-1细胞中显著升高。RT-qPCR实验检测分别转染3条si RNA序列进入细胞后Lnc NONRATG001910.2的表达水平,筛选出si RNA#2为最佳的小干扰序列用于后续实验研究。与LPS组相比,Lnc NONRATG001910.2过表达组能够显著促进HBZY-1细胞增殖,抑制HBZY-1细胞凋亡,而敲低Lnc NONRATG001910.2表达后HBZY-1细胞增殖受到抑制,诱导HBZY-1细胞凋亡。透射电镜结果显示,与LPS组相比,过表达Lnc NONRATG001910.2组线粒体的损伤更加严重,大部分线粒体空泡变性,核膜边界模糊不清,空泡增多。FISH以及核质分离实验结果表明,Lnc NONRATG001910.2主要定位于细胞质中。双荧光素酶实验证明miR-339-3p能够与NONRATG001910.2-WT和CTNNB1-WT有效结合,显著抑制荧光素酶活性。进一步验证miR-339-3p与Lnc NONRATG001910.2的作用发现,在Lnc NONRATG001910.2过表达质粒与miR-339-3p mimic共转染进入细胞中,与过表达Lnc NONRATG001910.2组相比,Lnc NONRATG001910.2的表达水平呈下降趋势,miR-339-3p表达水平显著上升,细胞增殖受到抑制,G2期细胞增多。通过miR-339-3p与CTNNB1作用实验发现,共转染miR-339-3p inhibitor与si CTNNB1#2进入LPS刺激的HBZY-1细胞,与转染miR-339-3p inhibitor的细胞相比,miR-339-3p的表达水平升高,CTNNB1表达水平下降,细胞增殖受到抑制,G2期细胞增多。在LPS刺激的HBZY-1细胞中共转染Lnc NONRATG001910.2和si CTNNB1#2时,与过表达Lnc NONRATG001910.2组相比,Lnc NONRATG001910.2和CTNNB1的表达量显著下降,miR-339-3p的表达量显著上升,提示转染si CTNNB1#2可逆转由于过表达Lnc NONRATG001910.2对Lnc NONRATG001910.2、CTNNB1和miR-339-3p表达水平的影响。在转染Lnc NONRATG001910.2过表达质粒/NC/si RNA/si RNA-NC的LPS刺激的HBZY-1细胞中检测CTNNB1、c-Myc、Cyclin D1的m RNA及蛋白表达水平,与LPS组相比,过表达Lnc NONRATG001910.2后,CTNNB1、c-Myc、Cyclin D1的m RNA及蛋白表达显著升高,而下调Lnc NONRATG001910.2表达,结果与之相反。2、健脾祛湿化瘀方调控Lnc NONRATG001910.2/miR-339-3p/CTNNB1轴改善CGN的机制研究通过CCK8法筛选出20%含药血清处理24 h为健脾祛湿化瘀方干预HBZY-1细胞增殖的最佳条件,进一步研究健脾祛湿化瘀方对细胞功能的影响,通过CCK8法与流式细胞术检测发现,与LPS刺激组相比,JQHF组和si RNA#2组能够抑制细胞增殖,G2期细胞增多,促进细胞凋亡。利用RT-qPCR技术检测Lnc NONRATG001910.2、miR-339-3p、CTNNB1、cMyc及Cyclin D1的RNA表达,JQHF组和si RNA#2组的Lnc NONRATG001910.2、CTNNB1、c-Myc及Cyclin D1表达水平相较于LPS刺激组显著降低,miR-339-3p表达水平相较于LPS刺激组显著升高。WB实验结果显示,JQHF组和si RNA#2组的CTNNB1、c-Myc及Cyclin D1蛋白表达水平相较于LPS刺激组显著下降。通过IF实验发现,相较于LPS组,JQHF组和si RNA#2组的CTNNB1、c-Myc及Cyclin D1平均光密度显著降低。回复实验发现,健脾祛湿化瘀方可逆转由于转染Lnc NONRATG001910.2过表达质粒引起的细胞功能变化。结论:1、在LPS刺激HBZY-1细胞的体外模型中,Lnc NONRATG001910.2可通过竞争性结合miR-339-3p,上调CTNNB1的表达,激活下游基因c-Myc、Cyclin D1,促进HBZY-1细胞增殖。2、健脾祛湿化瘀方可通过抑制Lnc NONRATG001910.2/miR-339-3p/CTNNB1轴的激活,下调c-Myc、Cyclin D1基因的表达,抑制HBZY-1细胞增殖。