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片形吸虫病是由大片形吸虫和肝片形吸虫寄生在草食性哺乳动物或人的肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是片形吸虫氧化还原系统中一个非常重要的抗氧化酶,TGR抑制物的研究和筛选可为研发抗大片形吸虫的新药物提供理论依据。本研究利用PCR技术从大片形吸虫cDNA中扩增得到FgTGR基因,并将细菌的硒代半胱氨酸插入元件(SECIS)融合到FgTGR的开放阅读框末端,形成嵌合基因FgTGR-SECIS,构建FgTGR的重组原核表达质粒pET-28a(+)-FgTGRsec,将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达得到重组蛋白rFgTGR。将重组质粒与硒蛋白表达工程质粒pSUABC共转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,在表达过程中添加亚硒酸钠和L-半胱氨酸,得到重组硒蛋白(rFgTGRsec)。通过His-tag蛋白纯化磁珠分别对两种蛋白进行纯化。建立了rFgTGRsec的TrxR、GR、GrxR三种酶活性检测体系,通过测定DTNB和NADPH的吸光值变化,分别计算rFgTGRsec的TrxR、GR和GrxR活性。在金属催化氧化系统(MCO)中加入超螺旋质粒与不同量的rFgTGRsec,通过DNA琼脂凝胶电泳观察超螺旋质粒的变化情况,判定rFgTGRsec的抗氧化功能。将rFgTGR注射免疫小鼠,以获得抗rFgTGR的小鼠血清用于免疫组织化学实验,观察TGR在大片形吸虫的组织分布情况。最后检测了62个新型Furoxan衍生物对rFgTGRsec中TrxR活性的作用效果,筛选抑制效果较好的化合物。本研究成功诱导表达了rFgTGR和rFgTGRsec,两种蛋白均以可溶性蛋白和包涵体两种形式表达,大小约71 kDa,rFgTGR表达量比rFgTGRsec高。建立的TrxR、GR、Grx三种酶活性检测体系的检测结果显示,纯化的rFgTGR的TrxR酶活性为24.28±1.51 U/mL,纯化的rFgTGRsec的TrxR酶活性为54.47±11.66 U/mL,GR酶活性为71.14±11.48 U/mL,Grx酶活性为11.86±1.88U/mL。TrxR以DTNB为底物的米氏常数为189.39±52.90μmol/L,硒的插入对TrxR酶活性有明显的提高,说明硒在FgTGR的功能中发挥重要作用。MCO质粒保护实验显示,rFgTGRsec在体系中的浓度达到50μg/mL时,开始对DNA超螺旋结构产生保护作用,但在600μg/mL时,仍未能产生完全的保护效果,说明rFgTGRsec具有一定的抗氧化活性。免疫组织化学实验表明,大片形吸虫TGR在虫体中呈广泛分布。在检测的62个新型Furoxan衍生物中,筛选出LGM-1、LGM-2、LGM-35、ZWJ-19和CH-33五个抑制效果较好的化合物,其IC50值分别是6.93±1.74μmol/L、15.19±0.80μmol/L、4.5±0.35μmol/L、3.82±0.33μmol/L和18.54±2.57μmol/L。本研究为后续FgTGR的抑制物筛选以及研制新的抗片形吸虫药物奠定了基础。