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本论文以毕赤酵母属(Pichia)及其相关子囊菌酵母为研究对象,进行了rDNA ITS区和26S rDNA D1/D2区序列、脉冲电泳核型的种内保守性和变异性评估;对酵母菌个体基因组内rDNA序列多态性进行了分析。并对西藏林芝地区子囊菌酵母多样性进行了调查,主要研究结果如下:
1)通过ITS区和D1/D2区序列分析,对中国普通微生物菌种保藏中心保藏的88株Pichia属及其相关子囊菌酵母进行了系统清理,其中50株的原定种名得到了确认;对30株的原定种名进行了更正,;原鉴定为Pichia farinosa的菌株AS 2.0706被确定为Kazachstania属新种,命名为Kazachstania aquatica sp.nov.;剩余7株菌分类地位还有待进一步确证。
2)以已有毕赤酵母属及其相关子囊菌酵母为材料,对其ITS和D1/D2区序列的种内保守性和变异性进行了评估,发现大部分菌株(~91%)种内ITS和D1/D2区的变异幅度一致,种内差异都在1%以内,但也存在不一致的情况。通过比较组内D1/D2区序列相同或相似的13组共48株酵母菌的ITS序列和脉冲电泳核型,发现ITS区序列和核型可能具有较大的变异,D1/D2、ITS、核型三个分子特征之间缺乏对应的相似性和稳定性。
3)对毕赤酵母属的模式种膜璞毕赤酵母(P.membranifaciens)20个异名的模式或权威菌株进行了D1/D2区、ITS区序列分析和核型分析,结果表明这20株菌至少分属于5个不同的种。其中14株被确定属于膜璞毕赤酵母;菌株CBS241(Zygosaccharomyces chevalieri var.fermentati的权威菌株)属于P.manshurica;菌株CBS243(Zygopichia chiantigiana的权威菌株)与CBS2287(P.fluxuum的模式菌株)属于同一个种;菌株CBS1367(Zygosaccharomycesbisporus的模式菌株)属于P.kluyveri var.kluyveri;菌株CBS989(Cryptococcus californicus的模式菌株)代表一个新组合(Candida calijbrnicacomb.nov.);菌株CBS189(P.calliphorae的模式菌株)和菌株CBS214(P derossii的模式菌株)D1/D2区序列、染色体核型和膜璞毕赤酵母相似,但是ITS区序列有显著的差异,因此还需要进一步研究。
4)在10株Pichia酵母菌株和1株Kluyveromyces菌株中发现了基因组内rDNA序列多态性。菌株AS2.2547(P. membranifaciens)的多态性现象最为明显,在其基因组内发现了两类ITS1、两类ITS2、四类26S rDNA D1/D2区序列,两类ITS1之间的差异为15.9%,两类ITS2之间的差异为21.9%,四类D1/D2区序列之间有8个多态性位点(6个碱基的连续删除、2个碱基替换)。逆转录PCR(RT-PCR)实验证明菌株AS2.2547多态性的rDNA都被成功转录,二级结构分析表明,差异的ITS1、ITS2、26S rDNA D1/D2区序列具有相似的二级结构特征,因此,证明这些差异的rDNA序列在菌株AS 2.2547内都具有正常的生物学功能;同时,通过分子系统学分析、核型分析、rDNA染色体定位分析,表明菌株AS 2.2547多态性形成的原因可能是菌株CBS107和CBS214杂交后基因重组的结果;此外,对酵母菌株个体基因组内rDNA多态性给酵母分子系统学产生的影响进行了分析。
5)对西藏林芝地区子囊菌酵母多样性研究中:共分离到子囊菌酵母263株,经形态观察和26S rDNA D1/D2区序列分析,发现共有6属29种,其中包括新种6个,新纪录种8个,另有4个疑难种,优势属为Metschnikowia和Candida,优势种为M. reukaufii,但没有发现Pichia属的菌株。