目的:通过对生首乌及制首乌41种醇提样品从化学分析与生物检定角度进行分析,比较何首乌不同炮制工艺减毒效果,寻找何首乌可能毒性成分,以期更准确地表征药材整体的肝毒性,为从药材质量层面降低何首乌临床肝损害的发生提供科学支持。方法:生首乌及制首乌共41种样品,采用50%乙醇进行提取,冷冻干燥得干浸膏,计算干膏得率。精密称取适量的何首乌样品干浸膏,配制成4 mg/m L(以生药量计)的供试品溶液。采用Agilent Technology 1290 Infinity UPLC超高效液相色谱仪进行化学分析。针对何首乌肝细胞毒性,以正常人肝细胞(L02细胞系)为研究载体,对乙酰氨基酚为阳性药,细胞抑制率为检测指标,评价何首乌不同炮品的细胞肝毒性。基于谱‐效相关分析,将化学检测和生物检测技术相结合,采用简单相关分析及多元数据统计方法,分析何首乌肝毒性成分,为其质量控制提供可参考的依据。成果:(1)样品的制备:制备了不同炮制压力、不同加热方式、不同加热时间、一蒸一晒到九蒸九晒、一蒸未晒到九蒸未晒共40种炮品,采用50%乙醇提取,不同炮品间出膏率差异较大;(2)指纹图谱及化学成分分析:不同炮制压力、不同加热方式、不同辅料炮制炮品化学指纹图谱差异不大,化学成分差异不明显;不同炮制时间、一蒸一晒到九蒸九晒、一蒸未晒到九蒸未晒炮品不同蒸制次数炮品间相似度差异明显;一蒸一晒到九蒸九晒与一蒸未晒到九蒸未晒炮品间在蒸制次数相同时,未晒样品相似度高于日光照晒样品。确定生品与炮品间主要差异成分最主要有儿茶素、顺式二苯乙烯苷、反式二苯乙烯苷、大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷。(3)生物毒性检测结果:不同炮品细胞抑制率不同。不同压力炮品,不同加热方式炮品,未晒炮品,不同辅料除辅料为大枣、米泔水、黑豆拌蒸、女贞子炮品,炮制前24小时炮品具有较高的毒性;日光照晒炮品,炮制36小时以上炮品,大枣、米泔水、女贞子炮品毒性相对低;未晒样品毒性高于日光照晒样品;一蒸一晒为何首乌最佳炮制工艺。(4)谱-效相关分析:通过毒价与主要成分的简单相关及线性回归,从不同压力炮品、不同辅料炮品、一蒸一晒到九蒸九晒炮品与生品进行分析,大黄素对于何首乌毒性有较大贡献度;而不同加热方式炮品、不同时间炮品、一蒸未晒到九蒸未晒炮品中,反式二苯乙烯苷对何首乌毒性有较大贡献度。可初步确定与何首乌毒性相关成分主要为大黄素和反式二苯乙烯苷。结论:何首乌通过炮制可以到达减毒的效果,炮制方法不同,成分变化不同,减毒效果也存在差异;日光照射对于何首乌炮制具有重要影响;一蒸一晒为最佳炮制工艺;与何首乌毒性相关成分主要为大黄素和反式二苯乙烯苷。