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目前抗生素在动物临床上的滥用已经普遍存在,而滥用的后果造成了极大的资源浪费和环境污染,动物疾病的有效诊断能够显著降低抗生素的滥用。作为一种机体的蛋白,降钙素原(Procalcitonin PCT)具有较高的灵敏度和特异性,在临床上是一种用于机体严重细菌感染性疾病和病毒感染性疾病的鉴别诊断指标。因此,本研究以犬的PCT蛋白为研究对象,通过原核表达,蛋白纯化,间接ELISA检测方法的建立以及重组蛋白的应用性分析来探讨犬PCT蛋白的临床应用性。首先,构建并验证了犬pET-30a-PCT表达载体。重组质粒双酶切以及测序结果显示,犬PCT蛋白基因成功克隆至pET-30a中,SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导的重组菌成功表达出分子质量为14.9 ku的蛋白,与预期结果相符。其次,进行重组蛋白纯化和验证。通过对影响蛋白表达的因素进行优化,SDS-PAGE结果显示,诱导温度28℃,IPTG终浓度1 mmol/L,诱导9 h,重组蛋白可溶性表达量较多。将His标签的单克隆抗体作一抗对重组蛋白进行验证,Western blot结果显示,重组蛋白与His标签的抗体发生特异性反应。随后,纯化重组蛋白,免疫小鼠,制备多克隆抗体。SDS-PAGE,Western blot和间接ELISA结果显示,纯化蛋白无杂带且具有良好的反应原性,多抗血清效价达到1:51200。间接ELISA检测方法的建立。通过对包被条件进行优化,结果表明,抗原最佳包被浓度为5 mg/L,最佳血清稀释浓度为1:200,最佳孵育时间为60 min;最佳二抗稀释倍数为1:5000,最佳孵育时间为30 min。敏感性试验结果表明本试验建立的间接ELISA敏感性较高。最后,进行重组蛋白应用性分析。通过间接ELISA检测方法对健康犬和炎症犬的血清进行检测,ELISA结果显示,发生炎症犬的血清内成功检测到PCT且与炎症反应程度呈正相关。综上所述,本研究通过对犬pET-30a-PCT原核表达载体的构建,重组蛋白的表达,间接ELISA检测方法的建立以及对该蛋白应用性的分析,为犬PCT蛋白生物学功能的进一步研究以及为其单克隆抗体的制备和免疫胶体金检测试纸的开发提供了理论基础。