论文部分内容阅读
电脉冲治疗癌症是一种新的癌症物理治疗方法,本文用电脉冲对细胞施加不同时间的电刺激,通过凋亡试验,细胞膜穿孔,线粒体跨膜电位变化实验来证实电脉冲对肿瘤组织的有效杀伤和抑制作用,研究脉冲个数与细胞响应的量效关系以及肿瘤细胞与正常细胞对电场刺激的差异性响应,得到以下结论:
1.用Annexin V-FITC凋亡试剂盒和流式细胞技术检测经1KV/cm,100μs的电脉冲作用人肝细胞L02和人肝癌细胞HepG2在不同的作用时间点(8s,15s,30s,60s)下的凋亡效应。结果显示,8s刺激时间不足以诱导HepG2细胞凋亡,而15s,30s,60s的刺激时间与对照组相比可以明显的诱导HepG2凋亡,并且凋亡率随刺激时增加而增大,说明延长刺激时间可以增大肿瘤细胞的凋亡程度;另外,在刺激60s时,肿瘤细胞凋亡率是正常细胞的2倍,这表明肿瘤细胞比正常细胞对电脉冲的刺激更敏感。
2.通过采用罗丹明123探针染色,用激光共聚焦显微镜实时观测细胞的线粒体膜电位荧光强度变化的实验研究,观察到电刺激30s前细胞线粒体膜电位无明显变化,而30后开始出现膜电位陡升后急剧降低的变化现象。由线粒体膜电位降低是凋亡早期现象的理论推测60s的作用时间能毁灭性的杀死肿瘤细胞,且电脉冲杀死细胞的线粒体膜电位变化为刺激中陡升后急剧降低,这是首次通过激光共聚焦显微镜观测到线粒体膜电位升高再降低的有趣现象。
3.通过PI探针染色,用倒置荧光显微镜实施观测并拍摄荧光照片,发现电脉冲刺激8s后无明显的穿孔现象,细胞形态完整,结构清晰,刺激35s开始肿瘤细胞出现大面积穿孔。
4.凋亡测试介于技术手段均采用悬浮细胞进行试验,而电穿孔和线粒体膜电位变化实验则采用贴壁细胞进行的实验研究,由凋亡结果里死亡率很低结合线粒体部分细胞在刺激后膜电位崩溃并失去细胞形态结构来看可以认为,贴壁细胞比悬浮细胞对电脉冲的刺激更敏感。