姜黄素(Curcumin, Cur),一种天然酚类化合物,是从姜科姜黄属植物姜黄的植物根茎中提取得到的,对多种肿瘤具有抑制作用,如结肠癌、十二指肠癌、食道癌、责门窦癌、胃癌、肝癌、胸腺癌、白血病、口腔癌和前列腺癌等,且基本无毒副作用。尽管作为化疗药的Cur在治疗癌症方面有很多潜在优势,但是Cur自身存在水溶性低、首过效应较强、生理pH值不稳定以及口服吸收差等缺陷,限制了其临床应用。聚合物胶束是一种由两亲嵌段共聚物在水中达到一定浓度后,自发形成的具有典型核-壳结构的药物传递系统。该胶束疏水段向内形成疏水性内核,通过物理包埋、化学结合和静电作用等方式用以包载疏水性药物；而亲水段向外形成胶束的亲水性外壳。近年来,聚合物胶束作为疏水性药物的载体受到了研究者的广泛关注,特别是在抗肿瘤方面,由于其具有粒径较小,血管渗透性较高,且能有效避免网状内皮系统的吞噬等特性,胶束可以在血液循环中存在较长时间,并随着载体材料的分解和药物扩散等作用,缓慢的释放药物,从而达到缓释及长循环的目的。利用某些肿瘤细胞表面过度表达的一些特异性受体,制备由配体介导的主动靶向传递系统,可以达到靶向定位传递给药的目的。叶酸受体(叶酸偶联蛋白)在很多实体瘤(如卵巢癌、肾癌、子宫癌、结肠癌、肺癌等)细胞表面会过度表达,但在正常细胞表面的表达较少。叶酸(FA)作为配体用于靶向细胞膜表面的叶酸受体靶向于癌细胞表面,并依赖叶酸受体介导的细胞内吞方式将纳米制剂递送于肿瘤细胞内部,达到预防并治疗肿瘤的目的。本文以FA为靶向因子,构建FA修饰的Cur聚合物纳米胶束制剂,以实现对叶酸受体过度表达的肿瘤细胞的主动靶向定位给药的作用。以一定比例的新型靶向材料叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG3000-PLA2000)和聚乙二醇-聚乳酸(PEG2000-PLA2000)为载体,采用薄膜水化法制备FA受体介导的聚合物纳米胶束靶向制剂,并对其进行理化性质和体外抗肿瘤活性等方面的相关研究。本文首先利用酰胺键将原料N-羟基琥珀酰亚胺活化的聚乙二醇-聚乳酸(NHS-PEG3000-PLA2000)和FA进行反应,合成了对叶酸受体具有靶向定位作用的生物可降解的两亲性聚合物材料FA-PEG3000-PLA2ooo,并经hNMR分析证明FA成功偶联到PEG3ooo-PLA2000上。采用薄膜水化法制备靶向聚合物纳米胶束。在单因素考察筛选的基础上,选用对制剂形成具有较大影响的主药用量、水化方法、水化时间及水化体积四个因素为考察对象,同时以聚合物纳米胶束的包封率和载药量作为质量指标,通过选用星点设计法(两因素五水平)对胶束的处方及制备工艺进行了优化。以FA-PEG3000-PLA2000与mPEG2ooo-PLA2ooo(其质量比为1：9)为载体材料成功制备得到靶向聚合物纳米胶束制剂Cur-FPPs。得到的最佳处方在透射电镜下观察,发现其分散性良好,粒子之间无粘连,且颗粒大小均匀,表面圆整,平均粒径在70nm左右,平均包封率为80.74±2.3%,平均载药量为4.8±1.9%,Zeta电位为-2.98mV,同时体外释放结果显示该靶向纳米胶束制剂具有明显的缓释作用。体外红细胞溶血性考察结果表明,在一定浓度范围内,该纳米胶束制剂对大鼠红细胞的溶血率小于5%,符合注射给药的相关要求。家兔耳缘静脉刺激性考察实验中,病理组织学检查结果显示,家兔耳缘静脉连续3天注射Cur胶束制剂后,兔耳缘静脉血管管壁结构完整,且内皮细胞结构清楚,周围无炎症细胞浸润,生理盐水注射组结果与制剂组无明显差别。表明纳米胶束制剂在实验剂量下无明显血管刺激性,可用于静脉注射给药。在大鼠尾静脉注射给药的药物代谢动力学实验中,采用高效液相色谱法(HPLC法)检测大鼠血浆中Cur的含量,用DAS2.0软件处理实验数据,求算药代动力学参数(AUC, MRT和t1/2等)。结果显示,非靶向的Cur纳米胶束(Cur-PP),靶向的Cur纳米胶束(Cur-FPP)与Cur原料药溶液的MRT0-∞分别为15.3h、14.7h和2.5h。载药纳米胶束制剂的MRT明显高于Cur原料药溶液,说明FA修饰的靶向聚合物纳米胶束作为静脉注射给药载体可延长Cur在血液循环中的存在时间,达到长循环的目的。体外细胞毒性实验采用经典的MTT法研究了聚合物纳米胶束的抗肿瘤细胞增殖作用,实验结果表明,该FA修饰的靶向纳米聚合物胶束制剂可明显提高Cur对肿瘤细胞的毒性,与Cur原料药组相比较,MCF-7细胞株的IC50值从87.1μg/mL降低到42.9μg/mL,HepG2细胞株的IC50值从85.7μg/mL下降到43.3μg/mL。采用荧光显微镜和流式细胞术分别定性与定量地考察了肿瘤细胞对制剂粒子的摄取能力,即制剂对肿瘤细胞的靶向作用能力。结果显示,经FA修饰后,聚合物纳米胶束可通过靶向叶酸受体定位于于肿瘤细胞表面,并通过内吞作用进入肿瘤细胞内部,增加药物在肿瘤部位的浓度,增强药物对肿瘤细胞的杀伤能力,进而达到治疗肿瘤的目的。以上结果表明,FA修饰的Cur聚合物纳米胶束制剂可显著提高水难溶性药物Cur的溶解度,延长药物在大鼠体内的作用时间,并且具有一定的体外肿瘤细胞靶向作用,在肿瘤的主动靶向治疗应用方面具有良好的前景。