PM2.5对大鼠骨髓基质细胞增殖及细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF分泌的影响

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[目的]   通过采集大气细颗粒物(PM2.5)作用于体外培养的SD大鼠骨髓基质细胞(BMSCs),研究PM2.5对BMSCs的增殖及细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF分泌的影响,探讨大气污染颗粒PM2.5对骨髓造血微环境的影响,从而为大气污染对血液系统恶性克隆性疾病发生、发展提供理论基础。   [方法]   1.采集PM2.5并配制成终浓度为10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的PM2.5溶液,将BMSCs分为对照组、10μg/ml、20μ g/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml染毒组。   2.体外培养SD大鼠的骨髓基质细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究。   3.用倒置显微镜观察各组不同浓度的PM2.5染毒SD大鼠BMSCs24小时后的细胞形态学改变。   4.用CCK-8法检测各组不同浓度的PM2.5染毒SD大鼠BMSCs不同时间(12h、24h、48h)后对BMSCs增殖的影响。   5.用ELISA法检测各组不同浓度PM2.5染毒SD大鼠BMSCs不同时间24h后对细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF分泌水平的影响。   6.用RT-PCR法检测各组不同浓度PM2.5染毒SD大鼠BMSCs24小时后对细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF的mRNA表达水平的影响。   [结果]   1.倒置显微镜下观察到不同浓度PM2.5染毒BMSCs24小时后,10μg/ml、20μg/ml组与对照组比较,细胞形态均一、生长旺盛、分裂增殖活跃,细胞数量变化不明显;50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml组与对照组比较,细胞数量逐渐减少,细胞形态逐渐多样化,细胞碎片逐渐增多,组间差异明显。   2.CCK-8法检测BMSCs增殖结果显示:同一浓度不同时间各组之间比较,随作用时间延长,增殖抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。同一时间不同浓度各组之间比较,随PM2.5浓度增加,表现为先促进后抑制的作用,低浓度PM2.5对BMSCs的增殖有刺激作用,当PM2.5浓度为10μg/ml、20μg/ml时,随PM2.5浓度增加,PM2.5对BMSCs的增殖刺激作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05);高浓度PM2.5对BMSCs的增殖有抑制作用,当PM2.5浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml时,随PM2.5浓度增加,PM2.5对BMSCs的增殖抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。   3.ELISA法检测BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF分泌情况结果显示:当PM2.5浓度为10μg/ml、20μg/ml时,随PM2.5浓度增加,BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF分泌量逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);当PM2.5浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml时,随PM2.5浓度增加,BMSCs细胞因子SCF、GM-CSF、G-CSF分泌量逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。   4.RT-PCR法检测BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF的mRNA表达水平的影响结果显示:当PM2.5浓度为10μg/ml、20μg/ml时,随PM2.5浓度增加,BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF的mRNA表达水平逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);当PM2.5浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml时,随PM2.5浓度增加,BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF的mRNA表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。   [结论]   1.低浓度(10μg/ml、20μg/ml) PM2.5对BMSCs的增殖有刺激作用,高浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)PM2.5对BMSCs的增殖有抑制作用。   2.低浓度(10μg/ml、20μg/ml)PM2.5促进BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF的分泌,高浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)PM2.5抑制BMSCs细胞因子SCF、G-CSF、GM-CSF的分泌。   3.PM2.5对BMSCs有一定的毒性作用。
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