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目的:采用高糖、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激体外培养的牙周膜细胞(Human periodontal ligament cells,hPDLCs),采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测hPDLCs在不同时间点分泌白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrotic-α,TNF-α)的变化状况及意义,探讨高糖状态及牙龈卟啉单胞菌内毒素LPS刺激hPDLCs上调炎症细胞因子的作用及机制,寻求糖尿病和牙周炎免疫病理机制的基础研究依据,为牙周炎伴糖尿病的炎症控制和组织修复提供新的思路和方法。方法:1、选择无全身系统疾病、吸烟史的12-18岁正畸治疗患者,因正畸治疗需要而拔除的无龋、无牙周炎症的健康前磨牙,在牙脱离牙槽窝后,立即刮下根中1/3的牙周膜组织,用组织块法进行hPDLCs的原代培养,进行首次传代,取第4-6代细胞用于实验。2、采用ELISA检测hPDLCs在高糖状态、高糖状态及P.g LPS(10μg/ml)刺激6、12h后TNF-α、IL-6的分泌情况,并与空白对照组低糖、P.g LPS组(低糖)进行对照。结果:1、在人牙周膜组织块原代培养一周后,镜下可见组织块周围有少量细胞爬出,细胞呈长梭形或星形,有2-4个细胞质突,围绕组织块呈放射状排布,部分交织成网状。从组织块爬出至长满整个培养瓶需要2周,长满后即用于传代,取4-6代hPDLCs用于实验。2、在经高糖状态、P.g LPS以及二者联合刺激6h后,hPDLCs分泌TNF-α明显高于空白对照组(P<0.05),实验结果有统计学意义,且随着时间的增加,效果更加明显,且呈时间依赖性。尤其是在高糖及LPS联合刺激12h后,hPDLCs分泌TNF-α的水平均明显高于其余各组。3、在经高糖状态刺激6h后,hPDLCs分泌IL-6相对与空白对照组无明显变化,无统计学差异(P>0.05),但由P.g LPS及P.g LPS+高糖状态联合刺激的两组相对于空白对照组(P<0.05),IL-6的分泌都显著升高,且随着时间的延长而逐渐增加,实验结果有统计学意义。结论:1、高糖状态可促进hPDLCs分泌TNF-α、IL-6。2、P.g LPS可促进hPDLCs分泌TNF-α、IL-6。3、高糖状态能显著促进hPDLCs在炎症下分泌TNF-α、IL-6,从一定程度上反映了糖尿病患者的高糖血症可能会加剧牙周炎的免疫应答。