TaBTF3基因在小麦中的克隆及其功能研究

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:rengegoodluck
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文采用cDNA末端快速扩增法(Rapid-amplification of cDNA ends, RACE),在小麦中首次克隆出BTF3基因(命名为TaBTF3)的序列全长,并采用VIGS(Virus-inducedgene silencing, VIGS)技术对其进行基因功能鉴定。主要研究结果如下:1.采用RACE-PCR技术从小麦中首次克隆到TaBTF3基因,其cDNA序列全长882bp,最大ORF序列为534bp,该基因编码一个由177个氨基酸组成的蛋白,预测分子量为20KD。基因组DNA序列全长1742bp,包含5个外显子、4个内含子,内含子和外显子的剪切位点严格符合GT/AC规律。实时定量PCR检测表明,TaBTF3在小麦根、叶、叶鞘、旗叶和幼穗中均有不同程度的表达,在旗叶中表达量最高,且受PEG、冷(4℃)、NaCl、MeJA、ABA和SA诱导上调表达。蛋白亚细胞定位结果表明,TaBTF3蛋白主要定位于细胞核与细胞质。Southern杂交结果显示,TaBTF3是多拷贝基因,以多拷贝的形式存在。2.选用大麦条纹花叶病毒(BSMV)载体,在豫麦34中成功沉默报告基因TaPDS(小麦八氢番茄红素脱氢酶基因),TaPDS-VIGS小麦植株叶片呈现明显的光漂白表型。GFP蛋白荧光检测结果表明,在BSMV-GFP植株的叶片与根系中均可以检测到较强的GFP荧光信号,BSMV诱导的基因沉默是系统性沉默,并不仅仅局限于接种叶片。高效稳定的小麦VIGS技术体系的成功建立,为小麦TaBTF3基因功能分析验证提供了技术平台。3.成功获得TaBTF3-VIGS植株与BSMV-GFP对照植株,并对BSMV-VIGS植株进行鉴定、生理指标检测。沉默TaBTF3基因导致叶绿素含量降低、MDA与H2O2含量显著升高。通过荧光定量PCR检测线粒体、叶绿体编码基因的表达量变化,结果表明,与BSMV-GFP对照植株相比,沉默TaBTF3基因导致线粒体、叶绿体编码基因的表达量显著下降。进一步采用石蜡切片技术观察TaBTF3-VIGS植株叶肉细胞的变化,结果显示,与对照相比,TaBTF3-VIGS植株的叶肉细胞发育异常、体积变小、排列松散、无序、胞间隙较大。由此表明,TaBTF3可能与线粒体、叶绿体和叶肉细胞的生长发育有关。4.通过荧光定量PCR检测小麦逆境相关基因的表达量,并对TaBTF3-VIGS植株与BSMV-GFP对照植株进行胁迫耐受性检测。结果表明,在正常生长条件下,沉默TaBTF3基因导致逆境相关基因的表达被抑制。逆境胁迫处理结果显示,TaBTF3-VIGS植株的相对电导率与失水率显著高于对照,而相对含水量与游离脯氨酸含量则明显降低。沉默TaBTF3降低了小麦植株对干旱和冻害胁迫的耐受性。这些结果表明,TaBTF3参与了植物逆境胁迫耐受性过程。
其他文献
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
用二酐BTDA与两种二胺单体(ODA、BAPP)在极性溶剂1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中,通过共缩聚制备出聚酰胺酸(PAA),并经过热酰亚胺化得到聚酰亚胺(PI)。采用FT-IR和1H-NMR对产物的
小学科学课堂强调让学生亲自参与科学探究,亲历研究过程,获得第一手的感知。在科学探究过程中,恰当地运用教学反馈表可以帮助教师了解学生的发现与获取的经验,帮助学生细致地
概述了开关柜的分类及操作程序,分析了开关柜的形式和加工方法,接着对开关柜的结构设计与制造进行了研究,阐述了其是如何影响开关柜体性能与品质的。
菊苣为菊科多年生草本植物,广泛分布于世界各地,是目前国内外广泛应用的主要饲草和蔬菜之一。菊苣体内含有多种重要的物质如倍半萜烯、内酯、内酯苷、黄酮类、香豆素、花色素
转座子是植物基因组的重要组成部分,对于研究植物基因组的组成、进化和基因的表达调控等都具有重要意义。植物转座子发掘、应用和活性调控机制的研究是近年来植物遗传育种和分
在近年来"互联网+医疗"背景下,微信公众号在医疗健康行业发挥着愈发重要的作用。我院国际医疗部顺应移动医疗趋势,积极应对市场竞争,适时推出微信公众号,宣传科室医疗服务,传
多子房小麦具有明显的穗粒数优势,如能应用到杂交小麦育种中将会是提高繁制种系数的一种有效途径,进而对杂交小麦的发展将会起到一个极大地促进作用。目前有关多子房小麦的研
西安,尽管是老名酒西凤的地盘,但外来品牌如口子窖者仍像过江之鲫,蚕食着陕西本士白酒品牌的市场。不过,当好强酒业成功运作起西凤六年陈和西凤十五年陈之后,情况变得不一样了。