目的：癫痫是脑内神经元高度同步化异常放电导致的发作性短暂脑功能失调综合征,属于神经系统的常见病和多发病,发病率约为5‰-7‰。癫痫的发病原因较为复杂,我们经常将病因尚不清楚的癫痫称为特发性癫痫,将病因明确的称之为症状性癫痫,症状性癫痫中有一些病因尚不明确者称为隐源性癫痫。癫痫的发病机理十分复杂,目前比较受关注的观点有离子通道学说、异常网络学说等,我们希望通过本实验来进一步阐明癫痫的发病机理。蛋白质是生物功能的主要载体。蛋白质组学方法主要是以研究生物体组织、细胞在不同的时间和不同的部位上所出现的所有蛋白质即全部蛋白质组为研究对象,以所有的蛋白质功能特性为基础,通过蛋白质水平的研究以此来阐明疾病发生的细胞及功能方面的机制。差异蛋白质组学技术通过定量实验来研究各种疾病状态下所有蛋白质水平的改变情况,以此来查找与疾病发生有关的蛋白质,在整体水平上研究引起某种疾病的蛋白质在翻译修饰等过程中的改变,从而可帮助我们寻找疾病的特异诊断诊断标志物和预后评估指标,对医务工作者更加深入地了解疾病的发病机制、为疾病诊断及新药研发提供帮助。本实验采用差异蛋白质组学技术对癫痫患者脑组织与对照组脑组织差异表达的蛋白质进行研究,建立了癫痫患者的差异凝胶电泳图谱,分析其蛋白质表达量的变化并进行差异蛋白鉴定,为进一步阐明癫痫的发病机理、寻找癫痫诊断标志物及新的药物治疗靶点提供依据。方法：1.标本来自山东大学第二医院神经外科确诊的6例癫痫患者致痫灶脑组织(癫痫组)及6例脑出血患者的周边正常脑组织(对照组),进行脑组织蛋白提取。2.双向荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence differencegel electrophoresis,2D-DIGE)方法进行对照组脑组织与癫痫组脑组织的分离,采用Typhoon多功能激光扫描成像系统进行凝胶扫描,然后应用ImageMaster分析软件分析图像,从中选取出存在差异表达的蛋白质点。3.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectro-metry MALDI-TOF-MS)技术对表达水平不同的蛋白质点进行分析,获得肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting, PMF),并将所获得的蛋白质采用Mascot软件进行数据库检索,进一步确定差异表达的蛋白质。4.免疫印迹(Western blot)技术进一步验证差异蛋白质胶质纤维酸性蛋白和cofilin-1蛋白在癫痫患者和对照组脑组织的表达水平。结果：1.通过对比发现癫痫患者与对照组脑组织有48个蛋白质点存在表达差异,通过NCBI数据库检索最终确定15种差异表达蛋白存在1.5倍以上表达差异,其中13个表达下调,2个表达上调。2.将鉴定出的不同表达水平的蛋白质按照功能进行分类,发现这些蛋白质功能涉及神经元保护、细胞骨架、氧化应激、氨基酸代谢、离子通道、细胞代谢、能量代谢等,推测它们存癫痫的发病中发挥了重要作用。3.免疫印迹实验显示癫痫组中胶质纤维酸性蛋白表达下调,cofilin-1表达上调。结论：本实验通过建立癫痫患者与对照组脑组织的双向荧光差异凝胶电泳图谱,最终鉴定出两者之间不同表达水平的蛋白质,考虑这些不同表达水平蛋白可能与癫痫的发生密切相关,可进一步为阐明癫痫的发病机制提供重要线索。