长角血蜱血淋巴蛋白和脂类的分析

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蜱类为专性吸血的外寄生动物,是节肢动物中的一个特殊类群,传播多种人、畜和野生动物疾病,对人类健康和畜牧业造成极大危害。血淋巴是蜱代谢过程中各种代谢物质储存和交换的场所,因此,血淋巴的研究对蜱类生理生化、病理学、毒理学以及蜱类组织和细胞培养等方面的研究都具有重要作用。本研究以广泛分布于我国的长角血蜱Haemaphysalis longicornis Neumann为研究对象,运用Bradford法、SDS-PAGE、免疫印迹和气相色谱/质谱等现代生物学及其交叉学科的研究方法,对不同发育期雌蜱血淋巴蛋白和脂类的成分与动态进行了较系统研究,为深入开展蜱类生理机制研究提供了依据。主要结果如下:1.基于蜱类血淋巴量少,离体易凝结、变黑和变性且提取过程中易污染等特性以及不同时期血淋巴量的不同,采用不同方法收集。饥饿雌蜱血淋巴量很少,采用划开边缘体壁的方法收集;吸血过程中,蜱类血淋巴量较多,采用切断蜱附肢法。2.血淋巴蛋白水平在饥饿雌蜱低(5.918mg/mL),吸血后蛋白含量迅速增加,进入交配期,蛋白含量不断增加,到饱血后四天达到最大值(17.834 mg/mL)。产卵期较之饱血后四天,含量明显减少,但与饱血两天比较,蛋白差异不显著。3.SDS-PAGE结果显示,血淋巴中的蛋白具有多样性,成分复杂。饥饿期,血淋巴蛋白成分相对较少,只显出分子量为246KD、103 KD、65KD、54KD和48KD蛋白带,各条带颜色很浅且细;吸血初期,蛋白成分有所增加,增加了5条带,分子量分别为348KD、95KD、80KD、62KD和58KD;交配期只增加了分子量为69KD的蛋白条带;饱血期蛋白成分最多,饱血后增加的条带分子量分别为320KD、222KD、192KD、165KD、134KD、112KD、78KD、71KD、60KD和35KD;饱血后直至产卵期,蛋白电泳图谱的总体特征基本一致,蛋白成分相对稳定且最为丰富。4.通过免疫印迹实验,鉴定了血淋巴中卵黄原蛋白Vg,经5%~15%的梯度PAGE电泳,考马斯亮蓝R-250染色,凝胶成像分析系统分析,测得Vg分子量为487 KD。5.应用GC/MS技术鉴定血淋巴脂类。结果表明,长角血蜱血淋巴有5种脂肪酸,且均为饱和脂肪酸,分别是14-甲基十五烷酸、棕榈酸、3-苯丙酸、16-甲基十七烷酸、硬脂酸。不同发育时期鉴定的脂肪酸结果大致相同,但各种脂肪酸所占百分比不同。
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