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目的:犬小孢子菌是一种可侵犯人和动物皮肤、毛发、甲的真菌,其突出的生物学特点是嗜角质性,引起皮肤的浅部感染。它不是机会性致病菌,而是真正感染健康机体的致病菌。随着人们生活水平的提高,猫狗等宠物与人类接触的增加导致犬小孢子菌病逐年增加,特别是犬小孢子菌所致脓癣例数急剧增加。有证据显示分泌性活性蛋白酶在它们侵入性方面扮演了重要的角色,然而除蛋白酶以外的因子与头癣的相关性及在头癣中的发病机制尚无报道。先期试验已经从不同的诱导培养基中培养出犬小孢子菌,即儿童头皮组织诱导培养基菌株(tester);儿童光滑皮肤组织诱导培养基菌株(driver1);成人头皮组织诱导培养基菌株( driver2 ),利用抑制消减杂交技术( suppression subtractive hybridization ,SSH)构建了tester与driver1(SSH1文库)和tester与driver2(SSH2文库)的两个正向差异基因文库,并进行了文库克隆。本实验就差异文库的进一步筛选及对获得的差异基因进行功能及定量分析,为下一步探讨差异基因在头癣发病机制中的作用及在豚鼠感染模型中的研究做出一些探索。方法:1.利用斑点杂交对SSH1和SSH2文库(均为250个克隆)进行阳性克隆筛选。2.对筛选的阳性克隆测序并利用BLAST在GenBank和蛋白质直系同源簇数据库(Clusters of Orthologous Groups of proteins,COG)上进行同源序列分析。3.利用实时PCR对差异基因进行定量检测。结果:1.斑点杂交后共得到110个阳性克隆。2.阳性克隆的测序:SSH1文库得到了62个有效序列,SSH2文库得到了44个有效序列。数据库的分析:去除混杂基因(与人基因同源性>98%,线性分数>=200;与真菌基因线性分数<40)后,共得到13个EST,其中5个为未知新序列,可能代表了tester特异表达的新基因,8个找到了同源基因,其中6个具有功能分类。3.实时PCR检测结果:SSH1文库中的FSH1和PQ-LRP基因在tester RNA池中的表达量分别为driver1 RNA池中表达量的44.6倍和117倍;SSH2文库中的P-GAL4和NADH1基因在tester RNA池中的表达量分别为driver2 RNA池中表达量的78.2倍和9.8倍。结论:1.在SSH1文库中筛选到5个同源基因:FSH1、PQ-LRP、multidrug resistance protein MDR、RING zinc finger protein和RING zinc finger protein, putative。在SSH2文库中筛选到3个同源基因:P-GAL4、NADH1和DNA-directed RNA polymerase I subunit。2. FSH1和PQ-LRP基因在儿童头皮组织诱导培养基菌株中相对于儿童光滑皮肤组织诱导培养基菌株中的上调表达表明,这2个基因在犬小孢子菌感染头皮组织中具有重要作用,可以作为犬小孢子菌致头癣的分子机理继续研究。3. P-GAL4和NADH1基因在儿童头皮组织诱导培养基菌株中相对于成人头皮组织诱导培养基菌株中的上调表达显示,这2个基因可能与犬小孢子菌更易于感染儿童有关,可以作为研究犬小孢子菌致病性的候选基因。